摘要：本試驗旨在研究飼料中添加植物甾醇對草魚幼魚生長、血脂、免疫功能及腸道形態的影響。選取健康、平均體重為(5.32±0.10)g的草魚幼魚540尾，隨機分為6組，每組3個重復，每個重復30尾，分別飼喂含0(對照組)、10、20、30、40和80mg/kg植物甾醇的試驗飼料。養殖試驗持續8周。結果表明：1)與對照組相比，飼料中添加植物甾醇顯著提高了草魚幼魚增重率和蛋白質效率（P<0.05），顯著降低了飼料系數（P<0.05）。2)飼料中添加植物甾醇有使血清甘油三酯和膽固醇含量下降的趨勢，其中20、30、40和80mg/kg組血清膽固醇含量顯著低于對照組（P<0.05），各添加組血清甘油三酯含量均顯著低于對照組（P<0.05）。3)與對照組相比，20、30和40mg/kg組血清溶菌酶活性顯著上升（P<0.05）；40和80mg/kg組血清C4補體含量顯著降低（P<0.05）。4)與對照組相比，30、40和80mg/kg組腸道黏膜厚度顯著增加（P<0.05）；20和30mg/kg組腸道脂肪酶活性顯著升高（P<0.05）。綜上所述，飼料中添加適量植物甾醇能夠促進草魚幼魚生長、降低飼料系數，并降低血脂，增強免疫以及腸道發育。

　　文/ 廣東蔚萊生物科技有限公司

　　關鍵詞：植物甾醇，草魚，生長性能，免疫

　　植物甾醇是一種具有植物活性成分的甾體類化合物，是植物細胞的重要組成成分，其分子含28-29個碳原子，C-3位羥基是非常重要的活性基團，是一種多功能活性因子。大量研究表明，植物甾醇具有降低膽固醇、抗氧化、抗癌、調節免疫等功能，迄今已開發出多種含有植物甾醇的功能性食品。2008年，我國農業部批準植物甾醇可作為功能性添加劑用于畜禽飼料。近年來，已有不少關于植物甾醇在畜禽生產中的應用研究，但植物甾醇在草魚等水產動物的研究應用鮮見報道。本試驗通過在草魚幼魚飼料中添加不同水平的植物甾醇，研究植物甾醇對草魚幼魚生長性能、血脂、免疫功能及腸道形態的影響，確定其最佳添加量，并為植物甾醇在草魚生產上的合理利用提供理論依據。

　　1、材料與方法

　　選取健康、平均體重為(5.32±0.10)g的草魚幼魚540尾，隨機分為6組，每組3個重復，每個重復30尾，分別飼喂含0(對照組)、10、20、30、40和80mg/kg植物甾醇的試驗飼料。

　　試驗基礎飼糧配方及營養成分表見表1。

　　表1 基礎飼糧組成及營養水平（風干基礎）

　　1.3飼養管理

　　根據水溫、溶氧、天氣和魚的攝食狀況進行投喂，每天三次，魚進箱時浸洗消毒。實驗期間，自然光照，每天觀察魚的活動和健康狀況，追蹤記錄死亡和投飼量。定期排污和換水，飼養周期為8周。

　　養殖試驗結束后，魚體饑餓24h后采樣。統計每個養殖箱的草魚尾數并稱總重，然后分別采集草魚的血清與腸道。每桶隨機取5尾羅非魚，用經肝素鈉試劑潤洗后的注射器進行尾靜脈采血，低溫靜置1h后，以4000r/min離心15min，制得血清樣品，置于-80℃冰箱中以備分析。

　　按下式計算增重率、蛋白質效率、飼料系數和成活率：

　　增重率(WGR，%)=100×(終末體重-初始體重)/初始體重；

　　蛋白質效率（PER，%）=100×(終末體重-初始體重)/（總投餌量×蛋白質含量）；

　　飼料系數(FCR)=總投餌量/魚總增重量；

　　成活率(SR，%)=100×終末尾數/初始尾數。

　　1.5.2血清生化指標的測定

　　將采集的血清從-80℃冰箱取出，解凍后待測。采用試劑盒測定血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）含量。測定方法按照北京北化康泰臨床試劑有限公司試劑盒使用說明。

　　將采集的血清從-80℃冰箱取出，解凍后待測。血清溶菌酶活性采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測定，補體C4含量采用浙江伊利康生物技術有限公司的試劑盒測定

　　1.5.4腸道脂肪酶及黏膜厚度的測定

　　腸道脂肪酶活性采用南京建成生物工程研究所的試劑盒測定。中腸經過AFA固定、乙醇逐級脫水、二甲苯透明、石蠟包埋、切片(5μm)、蘇木精－伊紅(HE)染色、脫水、透明、中性樹脂封片。在每組選取9張非連續性切片，用LeicaMD4000B顯微鏡觀察并拍照，每張切片隨機選取3個視野，圖像由MoticImagesPlus6.0軟件進行測量和計算黏膜厚度，分別取其平均值作為該樣品的測定結果。

　　試驗數據經Excel初步統計，采用SPSS18.0軟件進行方差分析，用Duncan法進行多重比較。以P＜0.05作為差異顯著性判斷標準，結果以平均值±標準差表示。

　　2.1植物甾醇對草魚幼魚生長性能的影響

　　植物甾醇對草魚幼魚生長性能的影響見表2。

　　由表2所示，飼料中添加植物甾醇的各試驗組草魚終末體重和增重率均高于對照組，其中添加20、30、40mk/kg植物甾醇的試驗組的草魚終末體重、增重率顯著高于對照組（P＜0.05）；添加植物甾醇的各試驗組的蛋白質效率均顯著高于對照組（P＜0.05），添加20、30、40、80mg/kg植物甾醇的試驗組的飼料系數顯著低于對照組和10mg/kg試驗組（P＜0.05），飼料中添加植物甾醇的各試驗組草魚幼魚的成活率與對照組相比差異不顯著（P＞0.05）。

　　表2 植物甾醇對草魚幼魚生長性能的影響

　　同行數據肩標相同字母或無字母表示差異不顯著（P>0.05），不同小寫字母表示差異顯著（P<0.05）。下表注釋同。

　　2.2植物甾醇對草魚幼魚血脂的影響

　　植物甾醇對草魚幼魚血脂的影響見表3。

　　由表3所示，與對照組相比，飼料中添加植物甾醇的各試驗組草魚血清總膽固醇和甘油三酯含量均有降低的趨勢，其中添加20、30、40、80mg/kg植物甾醇的試驗組總膽固醇含量顯著低于對照組（P＜0.05），添加植物甾醇的各試驗組甘油三酯含量均顯著低于對照組（P＜0.05）。

　　表3 植物甾醇對草魚幼魚血脂的影響

　　2.3植物甾醇對草魚幼魚免疫功能的影響

　　植物甾醇對草魚幼魚免疫功能的影響見表4.

　　由表4所示，飼料中添加植物甾醇提高了草魚血清中溶菌酶的活性，其中添加20、30和40mg/kg試驗組血清溶菌酶活性顯著高于對照組（P<0.05）；添加植物甾醇的各試驗組血清C4補體含量有降低趨勢，其中添加40和80mg/kg試驗組血清C4補體含量顯著降低（P<0.05）。

　　表4 植物甾醇對草魚幼魚血清免疫指標的影響

　　2.4植物甾醇對草魚幼魚腸道脂肪酶和形態指標的影響

　　植物甾醇對草魚幼魚腸道脂肪酶和形態指標的影響見表5。

　　由表5所示，飼料中添加植物甾醇能增強草魚腸道脂肪酶活性和增加腸道黏膜厚度，其中添加20和30mg/kg試驗組的草魚腸道脂肪酶活性顯著高于對照組（P＜0.05），添加30、40和80mg/kg試驗組的草魚腸道黏膜厚度顯著高于對照組（P＜0.05）。

　　表5 植物甾醇對草魚幼魚腸道脂肪酶和形態指標的影響

　　3、討論

　　3.1植物甾醇對草魚幼魚生長性能的影響

　　研究表明，植物甾醇在動物體內的作用與激素類似，具有一定的激素活性，與植物生長激素以及能在水中形成分子膜的脂質相結合，形成植物激素-植物甾醇-核糖核蛋白復合體，可以促進動物蛋白質的合成，促進動物生長。程業飛等在育肥豬飼料中分別添加30mg/kg普通植物甾醇和乳化植物甾醇，育肥豬的平均日增重ADG相比于對照組分別提高了2.17%和4.38%，料重比有所降低。姬紅波等研究結果表明，添加20mg/kg植物甾醇，肉雞生長前期（1~21d）和生長后期（22~42d）的平均日增重（ADG）分別顯著提高5.92%和4.26%（P＜0.05），生長后期（22~42d）料肉比降低4.48%（p＜0.05）。張嚴偉等研究發現，添加40、80mg/kg植物甾醇可顯著提高團頭魴質量增加率及特定生長率（P＜0.05）。本實驗室在吉富羅非魚飼料中添加20、40mg/kg植物甾醇其增重率分別顯著提高了12.92%和7.12%（P＜0.05），其飼料系數也分別顯著降低了10.62%和5.31%。本試驗結果與上述研究結果一致，添加不同水平的植物甾醇均能促進草魚的生長，降低飼料系數，顯著提高蛋白質效率（P＜0.05），促進蛋白質沉積，這是因為植物甾醇作為類固醇激素的前體物質，具有類激素功能，能與靶細胞受體結合，激發DNA的轉錄活動，生成新的mRNA，誘導蛋白質的合成。

　　3.2植物甾醇對草魚幼魚血脂的影響

　　血清中總膽固醇、甘油三酯等含量反映了機體脂質代謝的情況。早在上世紀50年代，就有研究發現從膳食中攝入植物甾醇越多，膽固醇的吸收率就越低，血清中膽固醇的含量就越低。近年來大量動物試驗研究結果表明飼料中添加植物甾醇能降低血清中總膽固醇含量。程業飛等研究發現在育肥豬飼料中添加30mg/kg普通植物甾醇或乳化植物甾醇均顯著降低了血清總膽固醇（TC）和甘油三酯（TG）水平（P＜0.05）。侯艷君等在異育銀鯽飼料中添加不同水平的植物甾醇，血漿膽固醇含量均顯著降低（P＜0.05），80mg/kg和120mg/kg添加組的甘油三酯含量顯著低于對照組（p＜0.05）。本實驗室在吉富羅非魚飼料中添加20、40、160mg/kg植物甾醇，總膽固醇、甘油三酯水平顯著低于對照組（P＜0.05）。在本試驗中添加不同水平的植物甾醇，草魚血清總膽固醇和甘油三酯含量均顯著降低，與文獻結果一致。因此植物甾醇能降低血脂，對草魚的脂質代謝具有一定的調節作用。

　　3.3植物甾醇對草魚幼魚血清免疫指標的影響

　　溶菌酶作為機體的體液免疫指標，在動物免疫防御中發揮重要作用，其活性高低是決定吞噬細胞能否殺滅所吞噬致病菌的物質基礎之一。本試驗條件下，添加植物甾醇提高了草魚血清溶菌酶的活性，表明植物甾醇具有一定的免疫調節功能，能提高機體的免疫力。補體系統廣泛存在于血清、組織液和細胞膜表面，可廣泛參與機體免疫調節，是機體內具有重要生物學意義的蛋白質反應系統和免疫效應放大系統，而C4為補體系統中的重要組分，在機體防御過程中可通過免疫復合物、調理吞噬細胞等機制對病原微生物進行清除及活化炎性細胞對靶細胞的殺傷作用。本試驗在草魚幼魚飼料中添加40mg/kg和80mg/kg植物甾醇組的草魚血清中補體C4的水平顯著降低，可能是因為植物甾醇添加過量則抑制了補體C4的活性。

　　3.4植物甾醇對草魚腸道脂肪酶和形態指標的影響

　　侯艷君等研究發現，添加40mg/kg植物甾醇組的異育銀鯽腸道內脂肪消化酶活性相比與對照組顯著提高（P＜0.05），本試驗中添加20、30mg/kg植物甾醇組的草魚腸道脂肪酶的活性也顯著升高，促進了魚體脂質代謝。另有研究發現在改善仔豬小腸絨毛形態上，植物甾醇的應用效果較多粘菌素E更為顯著，胡巧玲等研究表明添加植物甾醇顯著提高了仔豬十二指腸和空腸的絨毛高度/隱窩深度（P＜0.05），本試驗在草魚幼魚飼料中添加植物甾醇也增加了腸道黏膜厚度，以30、40、80mg/kg添加組尤為顯著，改善了腸絨毛形態，有利于腸道健康，促進營養物質的消化和吸收。

　　4、結論

　　在飼料中添加植物甾醇能促進草魚的生長，提高蛋白質效率并降低飼料系數，且能提高腸道脂肪酶的活性，降低魚體總膽固醇和甘油三酯的含量，還能提高魚體的免疫機能，并改善魚體的腸道健康。在本試驗條件下，草魚幼魚配合飼料中植物甾醇的最適添加量為30mg/kg。

　　蔚萊生物·生長因子定向激活專家

　　——蔚萊1號（植物甾醇）