原文作者:LocTran、D.V.Lightner等 翻譯:中國水產頻道通訊員 胡路怡



概述: 自2009年以來,早期死亡綜合癥(EMS),又稱急性肝胰腺壞死綜合癥(AHPNS)給亞洲的對蝦養殖產業造成了前所未有的沖擊。除了大規模減產外,該疾病還帶來了諸多負面問題,例如:對蝦養殖就業問題、社會福利問題、對蝦供求問題和全球對蝦總體價格問題等等。2013年5月,美國亞利桑那大學水產病理實驗室(UAZ-APL)定義其病原為副溶血弧菌Vibrioparahaemolyticus的特異菌株,該菌株能夠產生毒素并誘導健康對蝦致病;但是,此病原會在冰凍和解凍的過程中失活;感染AHPNS病原的對蝦不會對人類健康造成負面影響。 EMS/AHPNS病理重溫 急性肝胰腺壞死綜合癥爆發于投苗后45天內,目前作用于兩個對蝦養殖品種:南美白對蝦Litopenaeusvannamei和斑節對蝦Penaeusmonodon。感染AHPNS的對蝦肝胰腺白化并萎縮,嚴重時可以觀察到因黑色素沉積而產生的黑斑或黑色條紋,對蝦死亡率可在數天內達到100%。 組織病理學顯示,AHPNS的感染呈現出從基部到末梢的肝胰腺退化和功能障礙,部分細胞從壞死的組織上脫落后進入肝胰腺小管腔和腸道內。在感染的后期,肝胰腺內出現滲入的血細胞,伴隨著繼發性細菌定植其中,引起上皮細胞的大量壞死脫落。此種特殊的病變表明肝胰腺的壞死與毒素介導有關。 前期的研究 2011年至2012年,亞利桑那大學水產病理實驗室曾試圖通過兩方面的研究來尋找AHPNS的病因。第一,在水環境、底質、藻類、飼料和殺蟲劑中尋找可疑的毒素;第二,以冰凍的患病對蝦樣品做人工感染試驗。結論表明,此兩種方法均無法復制疾病。 2012年中后期,在越南的研究實驗中發現,通過投喂非冰凍的患病死亡對蝦,同患病對蝦混養,以及浸泡從患病對蝦消化道中分離出的混合菌株的方法,成功在健康的對蝦試驗池塘復制出了AHPNS癥狀。這些混合菌株的樣本也被送回亞利桑那大學做進一步的分析。 傳染性研究 在亞利桑那實驗室的傳染性研究中,兩種感染方法被依次采用:浸泡法和反向灌胃法(Reversegavage)。所謂的“反向灌胃”,指將病原提取物從肝門反向注射到肝胰腺中。實驗分為三個步驟:1.浸泡混合菌株的人工感染實驗;2.從混合菌株中分離出多個純菌株,依次浸泡感染后篩選純病原菌株;3.對能夠誘導AHPNS的純病原進行生物測定和反向灌胃試驗。 實驗結果表明:1.浸泡混合菌株可造成健康對蝦大量死亡并復制出與AHPNS相同的癥狀;2.浸泡從混合菌株中分離出的優勢純菌株也可以復制出與AHPNS相同的癥狀;3.該菌株可在對蝦體內復制,連續感染兩代對蝦并獲得相同癥狀。由此證實了AHPNS是由傳染性病原引起的。 有趣的是,從接種了純病原的培養基中提取的“無菌”上清液,通過反向灌胃法,可使健康對蝦獲得與AHPNS相同的病理特征。此現象對先前的“毒素介導”假設給予了佐證。利用生物化學和分子生物學手段,亞利桑那實驗室把AHPNS的病原定義為“副溶血弧菌Vibrioparahaemolyticus”的一種特異菌株。 人類健康和生物安全提示 部分副溶血弧菌產生的毒素具有一定的熱穩定性,人類誤食未煮熟的海鮮可能得腸胃疾病。幸運的是,AHPNS的病原副溶血弧菌不會產生熱穩定毒素。 由于AHPNS是一種傳染性疾病,對于養殖業而言,如何控制疾病的傳播是當務之急。亞利桑那大學認為,鮮活對蝦比冰凍對蝦具有更高的傳染性,因此,在AHPNS的快速檢測方法完善之前,從感染地區運輸出鮮活對蝦的風險不容低估。AHPNS病原主要集中在肝胰腺,去頭對蝦相比整蝦在運輸過程中的風險要低得多。 所有證據表明,對蝦在冰凍和解凍的過程中,AHPNS的病原已經失去生物活性。因此,對于進口國來說,冰凍的商品蝦不會帶來太大的疾病傳播風險。 未來研究方向 未來的研究將闡述“噬菌體”在參與弧菌毒素釋放和增強致病力中的作用。通過酶聯免疫吸附測定(ELISA)和聚合酶鏈式反應(PCR)診斷等方法,AHPNS病原體毒素和相關基因將作為主要分析目標。同時,多種疾病探測和控制方法也在逐步完善中。 關鍵詞:EMS AHPNS 南美白對蝦 D.V.Lightner 弧菌毒素
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