文/圖 新希望六和 廣東片區配方師 劉滿仔 中國水產頻道獨家報道,每年6-8月份的高溫季節,病害對養殖羅非魚的用戶來說,或是滅頂之災,不同程度的死亡讓養殖戶焦頭爛額,或大量藥物加之,或放棄治療,隨之任之。今年羅非魚病害依然嚴峻,據不完全統計,粵西各地區發病率有的已高達7成,部分客戶死魚非常嚴重;8月份持續高溫天氣,空氣溫度38℃,表層水溫36℃的情況時常存在,發病率非常高,大部分用戶養殖的羅非魚均有不同程度死亡,7-8月份市場平均投喂率可能只有1%左右;筆者通過幾年的市場實踐,在粵西地區,對鏈球菌致羅非魚之死作一概述,以對防治、養殖有參考意義。 1 鏈球菌的發現與分類 鏈球菌(Streptococcus spp.)是一種分布于自然界的革蘭氏陽性菌,是人、畜、魚等重要病原菌。目前已有多個國家報道了魚類鏈球菌的爆發和流行。最早發現魚類感染鏈球菌的是日本學者于1957年在虹鱒的養殖中發現的,近年來受感染的魚類包括多種海水魚和淡水魚類,溫水性魚類受鏈球菌的危害尤其嚴重。而中國南方以羅非魚為主的淡水魚類受鏈球菌感染近年來呈現上升趨勢。 根據國內外各研究機構從魚類分離的鏈球菌進行生理生化鑒定及分子生物學方法鑒定可分為海豚鏈球菌和無乳鏈球菌兩種。但根據國內的一些研究所等對海南和廣東等取樣分離鑒定,確定為無乳鏈球菌,因此,對粵西羅非魚危害最大的可能為無乳鏈球菌。無乳鏈球菌被認為是唯一擁有B群特異性抗原的鏈球菌,因而也稱為GBS。 2 最新臨床癥狀與組織病理學 羅非魚暴發鏈球菌病后,其臨床癥狀和書本、報道的描述有出入,在發病初期體表幾乎無任何癥狀,解剖后可見肝臟輕微壞死,花肝嚴重或局部壞死或整體顏色偏黑,離群獨游,身體顏色偏深,腸道食物甚少、腸道萎縮、膽囊稍偏大,膽汁發黑;發病嚴重者,體表主要表現為眼球突出渾濁(部分病魚)、體表充血(部分)、身體消瘦、顏色偏深、肛門紅腫(擠壓有黃色液體流出)、離群獨游、浮頭、轉圈、時而狂游、時而靜止于水面或岸邊,解剖可見肝臟壞死嚴重或黑肝或顏色很淺、脾臟腫大顏色偏紅或發黑、腸道無物、腸道萎縮或套腸,腸腔有淡黃色液體(部分病魚)。有學者對患病羅非魚進行組織病理學研究,發現其主要的組織病理變化為鰓充血、鰓上皮增生、融合,結構崩解;心肌纖維變性,肌間白細胞浸潤;肝臟顆粒變性和脂肪變性;腸道粘膜上皮變性、壞死、脫落、固有膜炎性白細胞浸潤;腎臟受損嚴重,白細胞浸潤,腎小管上皮細胞壞死,解體,小動脈血管壁玻璃樣變性;眼睛脈絡膜和眶骨膜組織炎性壞死,晶狀體纖維斷裂和脫離。 下圖為經檢測初步確定為鏈球菌感染的一些臨床癥狀 3 鏈球菌感染羅非魚通路 羅非魚感染鏈球菌的方式是多樣性的,如苗種自生攜帶、池塘底泥殘留、水質污染等,其傳播的方式以水平傳播為主,非常迅速,當在適當的溫度下爆發時,3-5天內可波及全塘,尤以魚的糞便、死魚的尸體、流通的水體等途徑傳播迅速。EVANS等認為,鏈球菌是通過魚體間的直接接觸或養殖環境受鏈球菌污染所致;AGNEW W、邱軍強等認為血溶性路線是鏈球菌感染傳播的主要途徑。但從近年來的研究發現,鏈球菌感染魚體后,通過體內循環直接進入細胞的細胞質內,破壞細胞質的線粒體后,供能系統受到破壞,體內DNA復制受阻,進而破壞細胞。 羅非魚感染鏈球菌的過程,從病理生物學和檢測的先后順序角度結合實際考察來看有以下過程(可能推測),如下圖所示。首先,魚體感染上鏈球菌后,在適當的溫度下大量繁殖,鏈球菌首先攻擊魚體的器官是肝臟,相關研究也表明首先是從肝臟分離出致病菌,肝臟被感染后,肝功能代謝發生障礙,由于肝臟是魚類儲藏血液和解毒的主要器官,當肝臟發生障礙后,肝臟顆粒變性和脂肪變性,魚體免疫機能下降;其次,脾臟發生變化,但并不是全部病魚都很明顯,明顯者如下圖所示,顏色和形態均出現異常,顏色變紅且淺,體型變厚變大且末端圓盾;然后,腎臟也會發生細微變化,嚴重者形成內出血;再者,病原菌感染頭部神經,這時候魚體已到感染后期,游動緩慢,離群獨游,或靜止于水面或岸邊,或在水面打圈游動;再而,病原菌在頭部大量繁殖,擠壓頭部神經,壓迫眼球擠壓推出,形成突眼,這時候已到病入膏肓時期,無可挽救,不日將死亡。其中肝臟受損后,因膽汁為肝臟分泌,膽囊也會有影響,常形成膽囊腫大,膽汁發黑現象。 4 鏈球菌發生之表觀分析 4.1 溫度是必要條件 粵西每年的羅非魚發病時間為5-9月份為多,集中在6-8月份,相關研究表明,鏈球菌最佳的發病水溫為32℃,而在晴天的晚上8點對水溫的測定,1-1.5米的水溫高達35℃。 鏈球菌是一種條件性致病菌特征非常明顯的一種細菌,縱觀全年的氣溫變化及養殖情況,這種病害集中發生在夏天,尤其持續高溫的天氣,水溫在32℃以上時極易爆發,而鏈球菌對飼料、品種、池塘條件、密度等的依賴性并不是十分強烈。也就是說,當池塘有鏈球菌存在,溫度達到要求,這種病害必定發生,而病害的程度才與其它因素有關。 以上為某養殖戶發病非常嚴重的池塘溫度,死亡量每天數千尾,可見當天下午3-4點空氣溫度為36.4℃,1.5米處溫度為33.5℃,而溶氧卻高達9.11 mg/L,氨氮,亞硝酸鹽幾乎沒有。 另一方面,對廉江區域的調查發現一個很有趣的現象,見下圖《廉江區池塘水深與發病率關系》所示,共調查的81養戶中,水體深度2-3米的發病率76.19%,4-5米深度的發病率45.24%,而6米以上深度的池塘發病率僅為27.78%,據有限的樣本數據可總結為,發病率與池塘水體深度呈負相關,水體深度與水溫密切相關,水越深,溫度越低,可推測為,溫度是直接影響病害發生的主要因素。 4.2 苗種因素表現突出 不完全調查表明,羅非魚鏈球菌病害與品種有很大關系。新挖的池塘并沒有感染源,卻發生嚴重病害;堅持每月消毒調水,水質條件非常好,溶氧6mg/L以上的池塘也發生嚴重死亡。當以上認為是鏈球菌感染事實后,可以懷疑是魚類的品種差異所導致的。 苗種因素可歸結為兩方面:一是苗種本身帶有致病菌,只是在適當的溫度下被激活繁殖,當達到一定程度下感染所致;二是苗種本身體質、抗病力差異較大情況下,因池塘存在或外界流入致病菌后,在適當的溫度條件下爆發,導致體質較弱的魚體先感染,后通過水平傳染致其它魚體大量感染。 而據粵西局部地區2012的不完全調查表明,奧尼品系與吉富品系在發病率和死亡量上還是存在很大的差異。見下表和下圖。 表1 粵西吉富品系客戶和奧尼品系客戶發病率比較 以上數據僅代表局部區域,不能概述全部。對總樣本量795戶的養殖戶調查表明,奧尼品系的抗病力明顯高于吉富品系。這種說法或太過籠統,并不是說吉富的抗病力就一定很差,因為選擇群體所用的吉富品系來源渠道各不相同,品種難以區分,加之粵西市場羅非魚苗魚龍混雜,分不清楚具體吉富品系。但總體可以說明,因吉富品系的苗種本身問題(親本退化,苗種來源復雜等)所導致的抗病力弱的情況非常嚴重,所以2012年至今,一些意識較強的養殖戶基本都會選擇價格更高的奧尼品種。 4.3 養殖密度 近年來國內外有些多學者、專家認為鏈球菌的發生與養殖密度有很大關系。NARAID等認為鏈球菌的發生與養殖密度過大、水質理化因子變化等引起魚體應激反應有關;HERNANDEZ等發現哥倫比亞的紅羅非魚感染無乳鏈球菌與高密度有關。但此這種說法太過籠統,到底多少才算密度過大,在什么樣的養殖模式下才算高密度,故此不能量化。本調查在粵西當前的養殖模式及養殖密度下,認為養殖密度與發病率并無直接關系,如下圖所示局部區域81戶樣本調查數據,放養600-1000尾/畝、1100-1500尾/畝、1600-2000尾/畝、2100-3000尾/畝,其發病率幾乎差別不大,在實際考察中,一些養殖戶4000-5000尾/畝的池塘也相安無事,而800尾/畝的池塘有的客戶卻發病嚴重,故根據局部區域調查表明,當前平均2000尾/畝的放養密度并不是制約疾病發生的因素。 4.4 水質與飼料 養魚先養水是有道理的,對于魚體來說,水體就是它生活的環境,良好的水質條件有利于提高魚體的免疫機能,減少疾病的發生并提高對飼料的消化率,降低飼料系數,而水質惡化如氨氮、亞硝酸鹽超標即加大了魚體肝膽負荷和機體抗應激壓力,進而刺激魚體更容易感染病原菌。不能說粵西的立體混養池塘水質過差就很容易感染鏈球菌,而海南文昌的精養羅非魚地區,基本無豬糞鴨糞污染,其水質條件良好,發病率有時候也高達9成。故水質并不是發生鏈球菌的必要條件,而是在一定程度上起到協同作用,所以調水內服的功效就是為了降低這種協同作用,通過水質調理和內服調控,提高魚體免疫機能,抑制病原菌的繁殖,還是有一定積極的效果。 飼料可能也會導致魚體感染鏈球菌,王瓊秋等發現鏈球菌病的漁場所用的飼料中存在與患病魚一致的鏈球菌。但現階段無直接數據證明飼料是誘發病害的原因,故此因素還有待進一步考察。當然,優質的飼料對提高消化及免疫力是有影響,劣質飼料只會加快肝膽病變的速度。有人甚至認為飼料中能量的高低,蛋白的高低會導致發生鏈球菌病,這是欠缺科學依據的。 5 鏈球菌檢測 嚴格來說,要確診是否鏈球菌感染必須是通過取樣、培養、分離,再通過分子生物學鑒定才能確定是否鏈球菌感染,而在臨床診斷上,可通過革蘭氏染色和鏡檢快速初步判斷是否鏈球菌感染,筆者通過數十例診斷,基本都能鑒定出來。 正常肝細胞視圖 感染后肝細胞視圖 但在高溫期并不是所有死魚就說明是鏈球菌引起的,其它細菌性疾病也可導致大量死魚,如下圖所示為在茂名市場發現的一起非鏈球菌感染的羅非魚死亡案例。 一種疑似某種桿菌引起羅非魚死亡 6 防治對策 羅非魚發病后,如何治療成為廣大養殖戶非常頭疼的問題,養殖戶停止投喂并不是為了控制病情,因投料與不投料對魚的死亡量沒有關系,故不投料純屬是為了降低飼料損失;事實上,任何事物的發生必然是量的積累過程,細心觀察會發現,鏈球菌感染也是量的積累結果。2014年5月份在吳川博鋪市場某養殖戶處,當時發現其魚塘零星數條死亡,隨即解剖活病魚查看,以臨床經驗診斷后,告知養殖戶這個魚塘在高溫月份可能有大量死亡的風險,當前必須做預防措施,但養殖戶不以為然,至6月份后開始有部分魚死亡,再次告知之并提供防治方案,養戶依然不以為然,至7月份后得知魚塘每天數千斤死亡量,損失慘重,養戶方想起當初的忠告。是故,病害并不可怕,可怕的是無知;病害是有預兆的,也是可以預防的。 治療,如果已經發生了大量的魚體死亡,即必須用抗生素治療,局部區域數量統計,抗生素的有效率僅為33.33%(見下表),很多養殖戶反饋治療沒有效果。事實上并不是沒有效果,而是藥的本身問題和用藥劑量問題,可發現市場抗生素獸藥非常繁多,其中不乏冒牌貨,假貨,而最終又是養殖戶來買單。在治療方面,目前市場上用的最多的是磺胺類藥物,但單用磺胺嘧啶,或只能發揮藥物的60%功效,要配合增效劑使用才更加有效。又如氟苯尼考,市場上的品種非常多,有效含量各不相同;其次,由于藥物本身質量問題,加之養殖戶在用藥劑量上不好把控,最終因魚體攝食劑量不夠而沒有達到理想效果。 表2 抗生素使用效果統計表 經過藥敏試驗是可以篩選出抑制鏈球菌有效的抗生素,陳昌福等從海南省某水產養殖場患病的奧尼羅非魚中,分離到1個編號LFY-08-23的菌株,經過分離菌株進行16SRNA基因的克隆及序列分析,結果發現LFY-08-23菌株與無乳鏈球菌的生理生化特性相似,高達99.8%,用分離出來的LFY-08-23菌株對異育銀鯽和斑點叉尾鮰人工感染試驗,在某種濃度下,LFY-08-23菌株對頭孢氨噻肟、丙氟哌酸、利福平、氧氟沙星、先鋒必、頭孢唑啉、頭孢拉啶、頭孢呋肟、潔霉素、紅霉素、青霉素、阿莫西林、左氟沙星等14 種藥物高度敏感;而對呋喃妥因、新生霉素、強力霉素、四環素、萬古霉素、麥迪霉素、氟苯尼考等7種藥物敏感;對卡那霉素、鏈霉素、慶大霉素、磺胺異惡唑、復方新諾明等5 種藥物不敏感。 表 3 LFY -08 -23 菌株對藥物敏感性的試驗結果 (注:摘自陳昌福,譚晶晶等,2010) 6.1 中西藥結合是較為有效的治療方法 至于具體的方法措施一定是根據病害的程度,有針對性處理,以下列舉一例典型的治療方法,可供參考。 茂名客戶某月14號魚種塘開始發病,前兩天10-50尾死亡量,三天后600尾,最高死亡量超過1000尾,癥狀如下圖,經鏡檢分析診斷,初步確定為鏈球菌感染。通過消毒,抗生素搭配中草藥類藥品內服,效果非常顯著。其中所用的抗生素為某品牌氟苯尼考(50%含量),中草藥主要成分為大黃、黃柏、黃芩等,消毒劑為某品牌二氧化氯,用量各根據說明書上的治療劑量。經過消毒,內服4天后,病情得到控制,死亡量慢慢減少,從1000多尾到幾尾,這種急發型病情的效果比較顯著,如果是長時間死亡了,此法效果不理想,可能是致病菌繁殖的量達到很高的程度。在治療期間要注意兩個問題:1 、內服投喂量不宜過大,1-1.5%即可。2、消毒與內服期間要開增氧機。 實際中,應根據病害的輕重緩急來處理,不同程度處理的方法不一樣,所用藥物也可不相同,如在消毒劑和中草藥的使用上,可選用的品種很多,但不管何種方法,安全是最重要的。 表4 客戶池塘羅非魚死亡量情況表 7 抗生素對魚體影響 很多研究表明,抗生素對魚體的生長及健康均有影響,有養殖戶反映投喂后,生長速度變慢,內臟變差。魚體攝食抗生素后,經過循環進入肝臟,作為解毒器官的肝臟會出現比較明顯的變化,是否藥物殘留,殘留多少與投喂時間和攝食劑量有關,但目前在市場上的一些零星發現,投喂抗生素后對魚體的肝臟是有影響的(暫不上圖)。 8對養殖規劃管理的影響 據以上分析總結,望對廣大養殖戶有借鑒之處,如何做好養殖規劃是養殖成功最為重要的環節。 8.1 做好全年養殖規劃節奏 以避開高溫月份,在放苗的時間與標粗應考慮到7-8月份的規格,如果是1-2兩發病,可停料減少損失,如果6兩以上發病,可根據情況出魚處理,最難處理的是3-6兩,損失是最嚴重的。 8.2 適當降溫 降低溫度的措施很多,如挖深魚塘,設置遮陽物,增氧攪動水體,高溫期不斷加注深井水等,可能很多養殖戶因條件有限做不到,但開增氧機是必要的,甚至可以全天輪流開,如在大塘可使用水車式增氧機、葉輪式增氧機、涌浪機等組合,輪流開啟,既能增氧也能降溫,而一些養殖理念較強的養戶,還采用了底部增氧措施。 8.3 選擇優質苗種 如果其他條件不能改變,建議選擇優質的苗種是一種比較安穩的措施,純種的奧尼是抗病力比較強的品種,優質的吉富也是不錯的選擇,總之,苗種帶有致病菌及苗種自身抗病力是整個養殖過程比較關鍵的環節。如2012-2013年吳川養殖區,某品牌的奧尼品系發病率僅為33%,死亡率很低,而來源比較復雜的吉富品系,不管發病率還是死亡率,都非常高。 8.4 投喂與內服 晴天最低溫度是早上,最高溫度是下午和晚上10點前,所以早上投喂是最安全的,要想魚體早上食欲好,晚上12點后可開增氧機至早上。高溫期間,適當減少投喂量,一般控制在2%以內。飼料中的脂肪來源不同,在高溫期間發生脂肪氧化的程度不一樣,如毛魚油(海水與淡水)在短時間內可氧化變質,攝食這些飼料,加大魚體肝膽負荷,降低免疫水平。 內服保肝護膽類藥物對預防鏈球菌效果甚微,需長期服用才有效果,可內服多糖類免疫增強劑(如黃芪多糖)及VC等配合使用,但需要7-10天持續投喂,或更長時間,而一般養殖戶很難做到。 8.5 適時消毒 有效和適當的消毒能有效解決大量死亡問題,尤其是在高溫起來前的強力徹底消毒(如氯制劑),和高溫期間的溫和性消毒能有效防止鏈球菌的大量繁殖,這些預防措施非常關鍵,把致病菌致病的風險降到最低,才能有效防止病害的發生。很多用戶通常使用生石灰,但在使用劑量和時間間隔上,筆者認為還有很大空間去挖掘。 8.6 水質管理 調水的成本很高,業務員和技術員的水平可能也有限,很多養殖戶水也調了,一個月還調了3次,錢也花了,但還是發病,主要還是沒有科學的調水理念,調水要有針對性,要清楚這次調水的目的是什么,如果是為了降低氨氮和亞硝酸鹽,要思考對鏈球菌是否起到抑制作用。事實上,氨氮和亞硝酸的降低并不是一兩次調水就能解決問題,尤其是高密度羅非魚蝦混養塘,調水是一個長期的過程,要堅持。很多研究表明,補充一定量的微生態制劑,對抑制有害細菌的產生是有效的,如使用EM菌,但要及時補充劑量。 9 小結 以多年的臨床經驗認為,鏈球菌既可以預防,也是可以治療控制的,但需要養殖戶提升養殖管理理念,把控各個關鍵關節。以上僅從局部區域情況去探討和分析問題,不能代表全部事實,同時亦有大量的數據調查和圖片沒有附上。以上僅供參考,或有不詳及不盡之述。 中國水產頻道(www.fuqitext.com)獨家報道,轉載請說明出處,違者追究法律責任, 謝謝合作。 【關鍵字】:羅非魚 鏈球菌 病害 水產養殖 |

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