非營養性免疫增強劑

　　

　　放養密度、日常管理、廢物的積累、環境中植物群和動物群、溶氧量、陽關以及水溫等養殖環境因素可能引起慢性、亞急性或急性疾病的爆發。甲殼動物缺乏一個真正的自適應免疫系統，而是出現依靠各種先天條件的免疫反應系統，以快速、有效地識別和摧毀“非自我”的物質(Lee and S鰀erh鋖l, 2002)。與疫苗不同，免疫增強劑是通過刺激非特異性免疫應答而提升許多動物對傳染性疾病的免疫反應的一類物質。免疫增強劑劑在水產養殖中的推廣主要是用來克服在系統壓力或高密度養殖下出現的一些正常的免疫效果。它們可以用來預防或抑制一些可以預期的季節性爆發的疾病或者已知的一些地方性疾病、潛伏或亞致死病原體等。

　　

　　免疫增強劑被廣泛的分為兩大類：營養免疫增強劑和非營養免疫增強劑。前者包括維生素（例如維生素C，B6，E，A），礦物質（如硒，鋅，銅），多不飽和脂肪酸（如n-3脂肪酸）等，后者則可能是化學物質或生物代謝產物(Sakai, 1999)。生物來源主要包括多糖、寡糖、微生態制劑和草藥（例如，中草藥）等，化學物質來源包括左旋咪唑，FK-565（庚酰基-YD-谷氨酰基 - （L） - 內消旋 - diaminopimelyl-（D）-丙氨酸）等。

　　

　　由于使用免疫增強劑作為飼料添加劑的研究較少，其投喂結果也沒用出現一貫的積極影響，因此免疫增強劑作為飼料添加劑的作用效果還不確定。同時部分產品還沒有明確的性質和來源。免疫增強劑吸收代謝的機制也沒有清晰。但是，免疫增強劑已經在蝦農中被廣泛的接受應用。

　　

　　Polysaccharides　　

　　

　　水產飼料中大多數免疫增強劑是來自細菌、真菌、酵母或者植物的多糖類物質。這些物質可能是細胞本身，也可能是細胞壁阻止的物質。近年來漁業免疫增強劑研究的重點一直放在β-葡聚糖上，主要是因為它們可以自然出現，并且不會在蝦體或水體內產生殘留物質。

　　

　　β-GLUCANS　　

　　

　　β-葡聚糖是酵母、真菌和谷類植物細胞壁中發現的葡糖糖聚合物。它由一個主鏈β（1→3）-連接β-D-吡喃葡糖的單位，由β（1→6）-鏈接不同長度和分布的側鏈而組成。β-葡聚糖的主要作用是可以綁定幾個導致免疫反應產生受體的白細胞，從而促進免疫反應，可以增強細菌的殺傷活性，調節細胞因子的產生，保證細胞、器官和整個動物體的存活。

　　

　　目前許多的商品免疫增強劑在對蝦養殖產業及蝦農中被廣泛的使用。然而，支持免疫增強劑使用效果的科學數據還很缺乏。Itami et al. (1998)報道指出，從嗜熱雙歧桿菌提取的β-葡聚糖可以增強日本對蝦對弧菌感染的抵抗力。Sung et al. (1998)等使用從酵母細胞壁提取的不同葡聚糖，β-3/1-6葡聚糖的研究得出，葡聚糖可以增強斑節對蝦對弧菌病及白斑綜合癥的抵抗力。另外Chang et al. (2000)等人研究得出，β-3葡聚糖添加到斑節對蝦飼料中可以增加其血細胞的吞噬活性、細胞的粘附能力以及加快超氧陰離子的產生速率。Tan et al. (2004)等認為口服β-3/1-6葡聚糖可以促進凡納濱對蝦的生長，增加機體免疫力和抗病力，此外，他們還進一步指出0.1％β-3/1-6葡聚糖可以增加凡納濱對蝦的抗病力，0.2％β-3/1-6葡聚糖可以加快凡納濱對蝦的生長(Tan et al., 2004)。

　　

　　在蝦類飼料中添加葡聚糖，除了劑量以外，添加頻率也是很重要的指標。在Sajeevan et al. (2009)等的研究中，對從海洋酵母中提取的堿不溶性葡聚糖對念珠菌S165的免疫效果進行了研究，對印度對蝦后期幼體分別投喂不能濃度葡聚糖（0.05，0.1，0.2，0.3，0.4g/100 g飼料）的飼料21天，以檢測其對白斑綜合癥病毒的抵抗力。結果得出在所有試驗組中投喂含葡聚糖0.2%的飼料的試驗組印度對蝦存活率最高。其后繼續使用葡聚糖含量為0.2%的飼料投喂，但改變該飼料的投喂頻率，分別為每天一次，兩天一次，五天一次，七天一次以及10天一次，連續投喂40天看其對白斑綜合癥病毒的抵抗力以及存活率，結果得出每七天投喂一次含0.2%葡聚糖的試驗組的存活率最高。這一結果與通過檢測印度對蝦總血球數、酚氧化酶活力、四氮唑藍還原能力等血液指標得出的數據相符。這些數據表明了在對蝦中使用免疫增強劑的劑量和頻率。

　　

　　LIPOPOLYSACCHARIDE　　

　　

　　脂多糖（LPS）來自革蘭氏陰性菌的細胞壁外膜。它們通常是大分子物質，具有特殊的化學結構，主要有三個區域組成，分別為外多糖的區域（俗稱'O'抗原的糖殘基，為直鏈或支鏈的組成部分），一個核心多糖區（包括短鏈的糖）和一個脂肪酸含量豐富區域（即與長鏈脂肪酸密切結合的糖脂區域）。高等動物對內毒素/LPS非常的敏感，即使很低的量也會引起高等動物的不適，但是有報道指出低等動物如青蛙和魚等具有耐內毒素的能力。但是蝦類中內毒素/LPS已發現是多個細菌性疾病的致病因素，特別是來自革蘭氏陰性菌的內毒素。

　　

　　Sritunyalucksana et al. (1999)指出，斑節對蝦脂多糖在體外的參與機制為凝血以及抗菌活性。Takahash et al. (2000)指出對日本對蝦口服給藥脂多糖（LPS）可以增強器對急性病毒血癥抵抗力，并且可以促進血淋巴對病毒發揮免疫作用。在對P. chinensis的研究中發現，在使用脂多糖刺激之后，其整體的血細胞數增加了83.4%，其中半顆粒細胞增加了100.4%，顆粒細胞增加了47% (Wang et al., 2005)。有研究表明，凡納濱對蝦能夠識別大腸桿菌的脂多糖并且通過相應的刺激激發可提高酚氧化酶活性的水平，增加總血球數和提高一氧化氮的水平(Rodriguez-Ramos et al., 2008)。Okumura (2007)研究指出，凡納濱對蝦的抗菌多肽系統會在基因水平上會對PLS產生回應，但酶源反應系統沒有在基因表達水平對LPS產生反應。

　　

　　OTHER POLYSACCHARIDES　　

　　

　　還有一些其他多糖類被認為是水產動物的免疫增強劑。Itami et al. (1998)的研究顯示，口服嗜熱雙歧桿菌產生的肽類物質可以增加日本對蝦顆粒細胞的吞噬能力。Wang and Chen (2005)吸收甲殼素6μg/g或者殼聚糖4μg/g可以增加其免疫力，提高抗溶藻弧菌感染的能力。Huang et al.(2006)指出，在0.5%和1.0%兩個最佳的濃度水平連續口服羊棲菜多糖提取物14天，可以有效加強對蝦對弧菌的抵抗力，增強對蝦的免疫活性。

　　

　　Probiotics　　

　　

　　益生菌是指活的微生物或者飼養動物的飼料添加劑。它可以通過抑制化合物的合成，營養物質的競爭或吸收，調節和刺激免疫功能以及改善微生物的平衡等多方面來影響動物的機能。在水產養殖中，益生菌可以通過飼料添加劑或者直接潑灑在水體中來控制疾病，增強機體的免疫功能，作為抗菌物質的補充甚至有時候還可以取代抗菌物質，為水生動物提供營養物質和共生酶類，改善水質等。微藻（融合微藻），酵母(Debaryomyces, Phaffia, and Saccharomyces)，及革蘭氏陽性菌（芽孢桿菌屬，肉桿菌屬，腸球菌屬，乳桿菌屬，乳球菌，微球菌屬，鏈球菌屬，和魏斯氏菌屬）和革蘭氏陰性菌（嗜水氣單胞菌，互生單胞菌，假單胞菌，弧菌）等已經被廣泛的運用在水產動物中用以促進動物的生長存活，維持動物機體的健康和疾病預防(Son et al., 2009)。

　　

　　大多數有益菌的研究都集中在凡納濱對蝦上進行。在凡納濱對蝦腸道中被分離處四種菌株，分別為弧菌溶藻弧菌UTM102，枯草芽孢桿菌UTM126中，玫瑰桿菌屬 SLV03，和假單胞菌屬 SLV22，在隨后的研究中證實這四種菌株均是有益菌，可以有效的抵抗副溶血弧菌引起的凡納濱對蝦疾病(Balcazar et al., 2007)。同時在凡納濱對蝦養殖中還有其他的一些微生態制劑或者作為飼料添加劑或者直接潑灑在水中，如有人在凡納濱對蝦消化道內分離出了芽孢桿菌(Li et al., 2009)，在池塘底部分離出了凝結芽孢桿菌(Zhou et al., 2009)，在發酵大豆中分離出了枯草芽孢桿菌E20 (Tseng et al., 2009)等。

　　

　　Herbs　　

　　

　　中草藥作為傳統的免疫增強劑在中國已經存在了幾千年的歷史。這些中草藥的活性成分很多，如多糖、生物堿以及黃酮類化合物等。在小鼠、雞以及人類細胞中中草藥作為免疫刺激劑已經被廣泛的研究利用。近年來，在水產養殖中也有越來越多的人開始關注中草藥的免疫刺激功能。

　　

　　已知可以提高魚類和貝類免疫力的中草藥主要有一下種類：（1）魚：大黃，穿心蓮，板藍根，金銀花(Chen et al., 2003)，黃芪和靈芝(Yin et al., 2009)，黃芪苷和當歸紅芪(Jian and Wu, 2004)等。（2）鮑魚：中國傳統的中藥制劑，其中橘子皮（陳皮），山楂，黃芪，黨參，板藍根，蒲公英和枸杞的比例為1:1:1.5:1.5:1.5:1.5:2(Xue et al., 2008)。

　　

　　在蝦類中，Lin et al. (2006)使用不同添加量的6中中草藥混合物（菘藍，大葉青，連翹，板藍根，延胡索白皮松，廣藿香和黃芪）飼料來投喂凡納濱對蝦。結果發現隨著飼料中中草藥含量的升高凡納濱對蝦的粗蛋白表觀消化率下降，然而脂肪和磷脂的表觀消化率隨著中草藥含量的升高而升高。Yeh et al. (2008)指出樟樹的粗提取物對凡納濱對蝦來講可能是取代化學治療的一種選擇，它可以抑制病原菌的生長，增強蝦的免疫力和抗病力。

　　

　　已有的數據研究表明，一些印度草藥可以提高蝦的免疫力。陸生植物蓖麻可以顯著提高印度對蝦對副溶血弧菌的抵抗力(Immanuel et al., 2004)。根據相關的研究數據可以得出，印度草藥（牙根，木橘，青牛膽茜草，黃連，旱蓮草）可以促進斑節對蝦對白斑綜合癥病毒的抵抗力。Citarasu et al.(2006)發現草藥免疫增強劑的應用可以有效的以及病毒的發病機制。