文/圖 福建大北農(nóng)水產(chǎn)科技有限公司 秦波 郭超藍
圖1 圖1眼球突出渾濁，尾鰭鑲白邊，體表、鰓蓋和下頜等處充血出血 羅非魚作為世界水產(chǎn)行業(yè)最主要的養(yǎng)殖品種之一，具有生長速度快、食性雜、肉質(zhì)好、營養(yǎng)價值高、繁殖能力強等優(yōu)點廣泛分布于熱帶亞熱帶的淡咸水域中。我國沿海地區(qū)特別是海南、廣東、福建、廣西等省份養(yǎng)殖的羅非魚產(chǎn)量占世界一半以上。 近年來，伴隨著羅非魚養(yǎng)殖面積和養(yǎng)殖密度越來越高，由無乳鏈球菌(Streptococcus agalactiae)感染引起的羅非魚鏈球菌病已經(jīng)成為阻礙我國羅非魚養(yǎng)殖業(yè)健康持續(xù)發(fā)展的主要因素。特別是自2009年以來羅非魚“鏈球菌病”呈現(xiàn)全國暴發(fā)的趨勢，在每年的高溫季節(jié)尤其是7-9月份，發(fā)病率在50%以上，死亡率最高可達80%以上。 目前羅非魚“鏈球菌病”缺乏安全高效的防控措施，雖然使用一定量的抗生素能在某些程度上抑制該病的暴發(fā)，但是隨著無乳鏈球菌耐藥性的增加，該病存在比較嚴重的停藥反彈的現(xiàn)象。每年由于羅非魚出口藥物殘留超標造成羅非魚出口受阻、國內(nèi)滯銷、魚價低迷給我國整個羅非魚產(chǎn)業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。尋找安全高效的的羅非魚“鏈球菌病”防控方法是目前眾多水產(chǎn)養(yǎng)殖者急需解決的問題。 一、樣品的采集與診斷 2015年10月，在福建省云霄縣常山下坂某養(yǎng)殖場暴發(fā)羅非魚“鏈球菌病”，規(guī)格在20cm左右，表現(xiàn)為典型的“鏈球菌病”癥狀�；疾◆~體表發(fā)黑在池邊漫游打轉(zhuǎn)，攝食減少，眼球突出渾濁，體表、鰓蓋和下頜等處充血出血，尾鰭鑲白邊，肝臟、膽囊、脾臟充血腫脹嚴重時糜爛，腸道和腹腔中充滿淡黃色積水，爛鰓并且潰爛部位附著污泥，鰓蓋內(nèi)側(cè)淤血，顯微觀察發(fā)現(xiàn)鰓絲表面有少許車輪蟲和指環(huán)蟲，鰓絲存在壞死灶，鰓小片毛細血管擴張出現(xiàn)充血現(xiàn)象，在鰓絲動脈中發(fā)現(xiàn)氣泡。
圖2 爛鰓，肝臟、膽囊、脾臟充血腫脹嚴重時糜爛，腸道和腹腔中充滿淡黃色積水
圖3寄生少許車輪蟲（1）和指環(huán)蟲（2），鰓絲存在壞死灶（3 ） ，鰓小片毛細血管擴張出現(xiàn)充血現(xiàn)象（4），在鰓絲動脈中發(fā)現(xiàn)氣泡（4） 二、病原分離純化與鑒定 使用70%的酒精棉球?qū)疾◆~體表進行擦拭消毒后進行解剖，用火焰灼燒過的接種環(huán)挑取少許肝臟組織于BHI固體培養(yǎng)基上進行劃線，37℃培養(yǎng)18h。根據(jù)培養(yǎng)結(jié)果挑取優(yōu)勢菌落重新進行劃線，同樣條件培養(yǎng)后在BHI培養(yǎng)基中進行劃線純化。將純化后的病原菌在BHI液體培養(yǎng)基中37℃，200r/min培養(yǎng)18h后將菌液送往生物公司進行測序后經(jīng)過比對得知為無乳鏈球菌。 三、藥敏實驗 使用4種常用消毒劑和5種抗生素藥品作為對比實驗，選取福爾馬林（有效成分：37%-40%甲醛）、衛(wèi)捷（有效成分：戊二醛、苯扎溴銨）、綠安（有效成分：月芐三甲氯銨）、金碘（有效成分：聚維酮碘）4種常見消毒藥和磺胺嘧啶鈉（有效成分：磺胺嘧啶鈉）、呋喃西林（有效成分：呋喃西林）、強力泰（有效成分：恩諾沙星）、呼樂芬（有效成分：氟苯尼考）、魚血安（有效成分：鹽酸環(huán)丙沙星、鹽酸小檗堿）5種抗生素，使用牛津杯法進行藥敏實驗。 吸取100μL培養(yǎng)后的病原菌液均勻涂布于使用BHI固體培養(yǎng)上，然后吸取雙蒸水稀釋后的不同消毒藥（1%）100μL打入牛津杯中，共做3個平行。 將5種抗生素各稱取0.2g溶于50ml雙蒸水中，配制成4g/L濃度的溶液。吸取100μL培養(yǎng)后的病原菌液均勻涂布于BHI固體培養(yǎng)基上，吸取100μL相應(yīng)的抗生素溶液于牛津杯中，連續(xù)做3個平行，37℃培養(yǎng)18h后觀察抑菌效果。 本實驗分離出的羅非魚鏈球菌病原菌在4種消毒劑（編號1-4）的對比中，對福爾馬林最為敏感，抑菌圈直徑在37mm左右，其次是衛(wèi)捷和綠安，抑菌圈直徑在24mm左右，通過3組實驗表明金碘對病原菌并不敏感，抑菌效果不明顯。 在5種抗生素（編號5-9）的對比實驗中發(fā)現(xiàn)，病原菌對魚血安最為敏感，抑菌圈直徑為34mm左右，強力泰、呼樂芬次之，抑菌圈直徑30mm左右， 最后是呋喃西林，抑菌圈直徑27mm左右，某些養(yǎng)殖戶常用的磺胺嘧啶鈉對無乳鏈球菌沒有抑菌效果。 表1 藥物抑菌圈大小  四、防治意見 羅非魚“鏈球菌病”給養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)帶來了巨大危害，一直都是困擾養(yǎng)殖戶的重大難題，目前仍未找到有效的方法來控制和治療該疾病。本文通過藥敏實驗篩選了一種水體消毒劑和一種合適的內(nèi)服藥來對羅非魚鏈球菌病進行防治，以減少養(yǎng)殖戶的經(jīng)濟損失。通過對4種常見消毒劑福爾馬林、衛(wèi)捷、綠安、金碘的藥敏結(jié)果發(fā)現(xiàn)福爾馬林的抑菌效果最強，衛(wèi)捷和綠安的效果基本一致，金碘抑菌效果不明顯。福爾馬林雖然抑菌效果最強但是對人體及羅非魚具有一定毒副作用，安全性方面相對于衛(wèi)捷或綠安略有差距。因此綜合考慮對于外潑消毒劑以衛(wèi)捷或綠安最為合適。 通過對5種抗生素藥敏實驗結(jié)果對比發(fā)現(xiàn)病原菌對魚血安最敏感，強力泰、呼樂芬次之，呋喃西林抑菌效果遠不如前三者，且該抗生素屬于人工合成的一類硝基呋喃類的廣譜抗菌藥物，近些年來發(fā)現(xiàn)呋喃類的藥物對人體具有潛在的致突變和致癌性，因此不推薦使用。磺胺嘧啶鈉作為一種磺胺類藥物是早些年羅非魚“鏈球菌病”防治的特效藥，隨著“鏈球菌病”的大量暴發(fā)某些養(yǎng)殖戶頻繁使用該類藥品，造成鏈球菌對磺胺類藥物產(chǎn)生極強的耐藥性。 本文通過藥敏實驗得知，磺胺嘧啶鈉對無乳鏈球菌沒有產(chǎn)生任何抑菌效果。這與該地區(qū)的某些養(yǎng)殖戶在羅非魚“鏈球菌病”暴發(fā)的時候投入大量磺胺類藥物沒有產(chǎn)生應(yīng)有治療的效果相符合。其他3種抗生素魚血安、強力泰和呼樂芬，由于安全性高，可以作為防治羅非魚鏈球菌的內(nèi)服藥，根據(jù)抑菌效果建議優(yōu)先選擇魚血安。 通過實地觀察該羅非魚養(yǎng)殖場水質(zhì)過濃溶氧過高導致羅非魚患“氣泡病”，潛在增加羅非魚的死亡率，因此建議潑灑二氧化氯進行消毒，以抑制藻類過度繁殖造成水體中溶氧過高。在鰓絲上發(fā)現(xiàn)少許的車輪蟲及指環(huán)蟲由于數(shù)量不多可以使用阿維菌素等刺激性小的殺蟲藥進行全池潑灑以抑制車輪蟲及指環(huán)蟲的生長，起到預(yù)防作用。 【關(guān)鍵字】：羅非魚 鏈球菌 防治 水產(chǎn)養(yǎng)殖 |
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