文/圖 通威股份有限公司動物保健研究所、水產養殖動物疾病防控技術國家地方聯合工程實驗室 王浩丞 劉天強 戴景輝；通威（海南）水產食品有限公司 王勇強 2015年11月中下旬，海南潭牛一養殖池塘出現羅非魚暴發性死亡，發病初期死亡40-60尾/天，高峰期死亡700-800尾/天，情況嚴重。水產養殖動物疾病防控技術國家地方聯合工程實驗室（簡稱“國家工程實驗室”）通過對該地區的羅非魚進行現場采樣，并進行實驗室診斷治療，取得了較好的效果，本文就此病診療情況介紹如下，以期對今后羅非魚嗜水氣單胞菌病的防治提供借鑒。 一、發病魚的臨床癥狀 池塘水溫為26-28℃，暴發疾病的魚規格主要為400-500g，發病初期死亡40-60尾/天，而后逐漸增多，高峰期死亡量達800尾/天以上。患病魚主要表現為食欲下降，離群獨游，反應遲鈍，在水面上層漂浮游動。病魚鰓蓋出血、肛門紅腫、鰭條、上下頜和腹部充出血（見圖1）。解剖后觀察發現，有胃出血、膽囊變大、膽囊壁變薄、肝臟充血或出血或呈現花斑癥狀（見圖2），腸道內無食物的癥狀。發病初期，養殖戶認為可能是鏈球菌病感染所致，就使用了磺胺類抗生素，但死亡量并未減少。后送樣至本國家工程實驗室進行診斷。
圖1 體表鰭條出血、腹部充出血
圖2 肝臟點狀出血，膽囊腫大 二、實驗室診斷 實驗室診斷未發現寄生蟲，使用通威股份最新研發的無乳鏈球菌快速診斷試紙條未檢測到無乳鏈球菌。而通過對病原菌分離，采用腦心浸液（BHI）培養基在患病魚體內分離到一株革蘭氏陰性短桿菌，菌體兩端鈍圓，菌株大小為（0.3-0.6）μm×（1.0-1.5）μm，在28℃條件恒溫培養18-24h，形成針尖狀、直徑約為1mm左右、表面光滑、邊緣整齊、圓形半透明的菌落。 通過16SrDNA基因擴增，得到約1500bp的擴增條帶，測序后在NCBI上進行BLAST比對，分離菌株與嗜水氣單胞菌的同源性最高，序列相似性達到99.5%。將分離到的細菌接種到健康羅非魚，在36h內實驗組出現死亡，且體表有點狀出血、鰭條出血、剖解見內臟充血或出血。并從人工接種感染的羅非魚肝臟組織分離到1株細菌，經16SrDNA基因擴增對比分析該菌株同樣為嗜水氣單胞菌。因而判斷該病為嗜水氣單胞菌感染所致。 三、藥敏試驗與治療 利用紙片擴散法，對該嗜水氣單胞菌株分別進行藥敏試驗，發現其對強力霉素、恩諾沙星、四環素、氟苯尼考敏感，而對卡那霉素、磺胺嘧啶、鏈霉素耐藥，丁胺卡那、慶大霉素、新霉素、壯觀霉素中度敏感。結合發病情況和藥用史，按照內服抗生素氟苯尼考（20mg/kg魚體重），同時內服維生素K3以6mg/kg魚體重，連續投喂5天；外用潑灑使用聚維酮碘消毒（1-2次）。藥物使用4天后，病情得到有效控制，死亡量降至70-80尾，連續使用2天后，死亡量減少到10余尾。 同時，簡易水質試劑盒測定該塘口后氨氮1.8mg/L、亞鹽高于0.3mg/L，因此先后使用底質改水解毒產品（如通威改水解毒寶，主要成分為吸附劑、絡合劑、表面活性劑等）和培藻產品（如通威伴侶Ⅳ，主要成分為藻種、多種微生物、多肽、礦物元素）對水質進行調節。經過處理，病情得到有效處置。 四、小結 羅非魚已經成為我國主要的淡水魚類品種之一，而疾病的發生逐漸成為制約羅非魚養殖業健康、持續、快速發展的瓶頸。目前，羅非魚鏈球菌病已成為危害羅非魚的最主要疾病，而無乳鏈球菌病是其主要病原，但也有嗜水氣單胞菌、熒光假單胞、愛德華氏菌感染羅非魚的報道。該羅非魚嗜水氣單胞菌病發生在11月份，據報道羅非魚鏈球菌病主要流行于6-8月，經實驗室初步診斷、分子生物學診斷、回歸試驗，最終確認是由于嗜水氣單胞菌感染所致。 從魚體發病的癥狀來看，鏈球菌病與羅非魚嗜水氣單胞菌兩者之間都有體表充、出血，羅非魚肝臟出血、膽囊腫大的癥狀，僅從肉眼無法做出準確判斷。而如需進一步確診病因需使用分子生物學等檢測手段，而無乳鏈球菌快速診斷試紙條因其具有操作簡單、方便、準確性高，診斷時間短，能夠有效確診是否為無乳鏈球菌病，降低了藥物亂用所帶來的養殖風險。 通過對患病池塘的水質檢測發現，池塘的水質較差，氨氮、亞鹽偏高，且水質較為渾濁、老化，投料后羅非魚自身產生的排泄物較多，投料產生的殘餌增加與水質變化加快有關系。嗜水氣單胞菌是屬于條件性致病菌，水體中氨氮、亞鹽的超標，或天氣的變化導致魚體處于應激狀態，自身抵抗力下降，導致了疾病的暴發。 在魚類疾病防控中，一直以來倡導“以防為主、快診早治、合理用藥”的防控理念，加強對養殖水體的管理，提高魚體自身的免疫抵抗力。在平時的養殖過程中，需要充分使用增氧機增氧，特別是在養殖中后期，以保持水體氧氣的充足，有條件的可以根據水質情況進行換水，日常可使用微生態制劑（EM菌、芽孢菌和光和菌等）對水質進行調節，保持水體處于良好的狀態。并可以通過對魚體內服保健（如多維和黃芪多糖等）來增強魚體免疫能力。對于發病池塘，因盡早確定病因，才能對癥下藥，及時有效的采取相應措施控制病情，降低養殖經濟損失。 |
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