中國水產頻道獨家報道，針對養殖戶反映的南美白對蝦生長緩慢的現象，本研究采用 EHP（蝦肝腸胞蟲）和 IHHNV（傳染性皮下及造血組織壞死病毒）實時熒光定量 PCR（RT-PCR）檢測方法，對粵西地區的南美白對蝦親蝦、蝦苗、成蝦、餌料、鮮活餌料和育苗與養殖水體進行檢測，分析這兩種病原在種苗生產與對蝦養殖中的流行情況。

　　

　　一、材料與方法

　　

　　1、試驗材料

　　

　　本試驗用到的蝦苗、種蝦、成蝦、種蝦餌料和育苗與養殖用水樣品均由湛江恒興南方海洋科技有限公司實驗室收集，樣品分別采自于粵西區域的育苗與養殖場。

　　

　　EHP熒光定量 PCR檢測試劑盒，熒光定量 PCR儀（TL988），解剖剪等。

　　

　　2、試驗方法

　　

　�。�1）樣品處理

　　

　　蝦苗：用生理鹽水沖洗蝦苗表面3次以上，隨機挑取 10尾，置于玻璃研磨器中充分研磨后，用磁珠法提取DNA。親蝦、成蝦：分別取鮮活蝦體的肝胰臟 0.1g（約黃豆大�。�，同上。種蝦餌料：取種蝦餌料 0.1g，同上。水樣：分別量取 80mL的水樣，高速離心8min，棄上層清夜；吸取 1mL生理鹽水，充分懸浮沉淀，轉入 1.5mL的 EP管中，高速離心5min，棄上層清夜，同上。

　　

　�。�2） EHP熒光定量 PCR檢測

　　

　　以上述提取的 DNA為模板，進行實時定量熒光 PCR檢測。20μL反應體系，參照試劑盒的說明書進行配置。擴增條件：95℃預變性 2min；94℃變性10S，60℃退火 30S（此處采集熒光，設置為 FAM綠色熒光），共 40個循環。

　　

　　二、結果與分析

　　

　　1、多種樣品的 EHP和 IHHNV檢測結果

　　

　　用 RT-PCR檢測方法對粵西地區的有關南美白對蝦樣品進行 EHP和IHHNV檢測，結果匯總后如表 1所示。從表1中可知，共檢測的 87份樣品中，EHP的檢出率為41.38%，IHHNV的檢出率為 12.18%。EHP檢出率較高的為成蝦和種蝦樣品，分別為 93.75%和66.67%。同樣，IHHNV檢出率也較高分別為 31.25%和38.10%。其中未經處理過的 2份海水樣品均有檢出 EHP和IHNNV，但經過消毒處理后的育苗與養殖用水未檢測到 EHP和IHHNV。

　　

　　2、進口樣品與本地樣品的 EHP和IHHNV檢測結果

　　

　　分別對進口種蝦、進口一代苗、本地種蝦和本地蝦苗進行檢測，結果見表2。從表 2可知，6份進口種蝦樣品中，EHP檢出率較低為 33.33%，且未檢測到 IHHNV。同樣，進口的一代苗中，EHP檢出率為30.00%，IHHNV的檢出率較低，為 10%。本地種蝦的 EHP和IHHNV檢出率最高，分別為 80.00%和53.33%。本地蝦苗的 EHP檢出率為21.74%，IHHNV檢出率為34.78%。

　　

　　3、不同成蝦樣品的 EHP和 IHHNV檢測結果

　　

　　為了探究南美白對蝦感染 EHP和IHHNV對生長的影響，筆者對不同養殖環境（不同養殖場）、不同養殖時長和不同規格的對蝦樣品進行了上述病原的檢測。不同養殖場成蝦檢測結果如表3所示，A養殖場的腸胞蟲載量最高，對蝦平均日增長體重（簡稱“日增長量”）最低為 0.039g。C養殖場的腸胞蟲含量最少，其平均日增長量比其它兩個場的高，為 0.090g。3個養殖場的樣品均未檢測出IHHNV。

　　

　　B養殖場不同養殖時長對蝦的檢測結果（見表 4）。3份樣品都有檢出EHP，其日增長量最大的 B-24樣品，EHP載量相對最低；而日增長量最小的 B-17樣，EHP載量相對最高。另在B-23的樣品中有檢出IHHNV。

　　

　　B養殖 20號池不同規格對蝦（養殖時間 116天）的檢測結果如表 5所示，EHP的載量指數（ERCEHP）相同；其平均日增長量為其成蝦樣品中沒有檢測到IHHNV。

　　

　　根據以上檢測對蝦的養殖時長和體重以及對其 EHP的檢測結果，得到日增長量與 EHP載量指數（ERCEHP）的關系圖（見圖 1）。從圖中可見對蝦的日增長量與 EHP載量指數呈一定的對數關系（R2=0.5746）。

　　

　　三、討論

　　

　　近年來，腸胞蟲在全球南美白對蝦養殖業中流行范圍很廣，先后在泰國、馬來西亞、印度等國檢測出該病原，在我國江蘇沿海和廣東沿海地區也多有檢出。2015年浙江省水產技術推廣站對浙江地區的 134份蝦苗樣品進行檢測，EHP的檢出率高達53.8%，HHNV的檢出率為 25.4%；江蘇沿海地區南美白對蝦 EHP的發病率約為 25%。本研究對粵西區域的 87份樣品進行檢測，EHP的檢出率為41.38%，IHHNV的檢出率為 12.18%。另在檢測樣品中，兩份不同海域的海水樣品有檢測到 EHP和 IHNNV，而經過消毒處理過的養殖用水和育苗用水中未檢測出上述病原，可見事先進行水處理對養殖和育苗的重要性。EHP和 IHHNV的檢出率較高的為成蝦樣品，可見在成蝦養殖過程中最容易感染到該兩種病原。分別對粵西地區進口種蝦和本地選育種蝦進行調查，結果發現進口種蝦中 EHP的檢測率為33.33%，沒有檢出 IHHNV；而在一代苗中，IHHNV檢出率為 10.00%，說明在對蝦在幼體生產及育苗過程中感染到了IHHNV。

　　

　　從本文對不同養殖場、不同養殖時長和不同規格對蝦的檢測結果中發現：3個養殖場的對蝦 EHP載量差異大，EHP載量高的對蝦日增長量最小，而日增量大的 EHP載量底；在 B養殖場不同時長的對蝦檢測結果中，發現養殖時長與 EHP載量沒有相關性，其感染量基本相同；B養殖 20號池不同規格的對蝦 EHP載量指數一致。綜上所述，對蝦 EHP的載量與養殖環境有緊密聯系，環境不同其 EHP的載量指數不同。因此在對蝦養殖過程中，養殖水體、飼養餌料以及養殖工具等環境因素的嚴格把關，對控制對蝦感染 EHP病原極為重要。

　　

　　對蝦日增長量與 EHP載量指數呈一定的對數關系（R病毒 =0.5746），EHP載量指數增大，日增長量呈對數下降。結果與劉珍的試驗結果稱負相關性吻合。但由于試驗局限，R 2較低，有待后期試驗進一步的優化。