中國水產(chǎn)頻道報道，不同種類的微孢子蟲會對對蝦的肌肉組織，心臟，性腺，鰓，肝胰臟，和神經(jīng)節(jié)產(chǎn)生感染。對蝦微孢子蟲被視為對蝦群體一個潛在威脅，并且會對水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的經(jīng)濟效益造成影響。近期，一種叫對蝦腸胞蟲病(EHP)的微孢子被發(fā)現(xiàn)存在于對蝦的肝胰腺中的小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中。在一些東南亞國家，例如越南，泰國，馬來西亞，印度尼西亞，中國和印度的對蝦養(yǎng)殖場已經(jīng)相繼發(fā)現(xiàn)此類微孢子的存在。對蝦腸胞蟲病(EHP)的臨床癥狀還未具體化，但已發(fā)現(xiàn)與對蝦發(fā)育遲緩有關(guān)聯(lián)。 對蝦腸孢蟲病(EHP)的組織病理學(xué) 在檢查被對蝦腸孢蟲�。‥HP）感染的來自越南的南美白對蝦（2014）樣本中發(fā)現(xiàn)肝胰腺小管上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中存在嗜堿細(xì)胞內(nèi)含物（圖1A&1B）。在這實驗中，孢蟲呈現(xiàn)出原形體階段,成熟嗜堿性的孢子也被檢測到。被對蝦腸孢蟲病（EHP）感染的來自文萊的藍對蝦（2006）也發(fā)現(xiàn)微孢子蟲存在于肝胰腺（圖1C）。這些結(jié)果顯示對蝦腸孢蟲病（EHP）早在2006年就存在在亞洲。 對蝦腸孢蟲病的聚合酶鏈反應(yīng)
圖1：對蝦腸孢蟲病(EHP)組織病理學(xué)顯現(xiàn)在感染的對蝦上。（A&B）南美白對蝦的肝臟胰組織，（C）藍對蝦。箭頭代表成熟的孢子；星星代表原形體階段。（比例=25μm.） 我們選擇用來檢測對蝦腸孢蟲�。‥HP）的染色體底物包括EHP-510F(5’-GCCTGAGAGATGGCTCCCACG)和EHP-510R(5’-GCGTACTATCCCCAGAGCCCG)。用已經(jīng)受感染的對蝦DNA提取物實施聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）。結(jié)果顯示這個聚合酶鏈反應(yīng)能夠檢測出已受感染的對蝦（圖2，1-3行）；染病對蝦的排泄物以及水質(zhì)樣本均被檢測出感染對蝦腸孢蟲（EHP）（圖2，4-5行）。同時我們也檢測了另外兩種寄生蟲病原體：阿米巴蟲和蝦白肉病微孢子蟲，然而這些對蝦腸孢蟲�。‥HP）底物并沒有與該兩種病蟲發(fā)生交叉反應(yīng)（圖2，6-7行）。
圖4.用地高辛標(biāo)記法標(biāo)記的對蝦腸孢蟲病(EHP)探針在對連續(xù)部位進行原位雜交。深藍色沉淀物表示對蝦腸孢蟲病(EHP)的出現(xiàn)（A）用對蝦腸孢蟲病(EHP)探針對南美白對蝦（越南）進行原位雜交；（B）藍對蝦（文萊）；（C）斑節(jié)對蝦表現(xiàn)出了白肉病癥狀（馬達加斯加），插入圖片（D）：使用Pereziapenaei探針的原位雜交。比例條＝25μm。 令人意外的是，我們從4/9的冷凍鹵蟲生物樣本中檢測出對蝦腸孢蟲病(EHP)（圖2，9行，一個非常具有代表性的樣本）。在這些對對蝦腸孢蟲病(EHP)呈陽性的樣本中，18SrRNA基因被擴充和重新排列。這個被修改的序列與來自越南的對蝦腸孢蟲病樣本有99.9%的相似，也就是說鹵蟲中所帶有的對蝦腸孢蟲病(EHP)很可能源自東南亞。 對蝦腸孢蟲病傳播的研究 以上三個生物測定均使用來自泰國的已感染對蝦腸孢蟲病的對蝦樣本。在第一個生物測定（共棲組）中，染病對蝦被轉(zhuǎn)移到實驗缸中與用高彈體標(biāo)記的無特定病原體的對蝦一起生活。35天后，無特定病原體的對蝦感染對蝦腸孢蟲病原（圖3A）。在第二個生物測定（水生感染組）中，用曾飼養(yǎng)過染病對蝦的水體轉(zhuǎn)移到無特定病原體的對蝦實驗缸中。42天以后，無特定病原體的對蝦依舊沒有感染病原（圖3A）。在第三個生物測定中，用染病對蝦的肝胰腺喂養(yǎng)無特定病原體的對蝦，每隔五天用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）分析樣本；15天后，無特定病原體的對蝦感染病原（圖3B）。實驗結(jié)果顯示，對蝦腸孢蟲病（EHP）可以通過嗜食同類傳播。 原位雜交（ISH） 通過用地高辛標(biāo)記法標(biāo)記的對蝦腸孢蟲病進行原位雜交，染病的南美白對蝦（圖4A）和藍對蝦（圖4B）顯示微孢子（嗜堿性的內(nèi)含物）存在于肝胰腺小管的上皮細(xì)胞中。實驗中的探針具有非常高的識別敏銳性，在已感染蝦白肉病的斑節(jié)對蝦中，該探針無任何反應(yīng)顯示（圖4C）。 結(jié)語
圖2.對蝦腸孢蟲病聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測對蝦腸孢蟲�。‥HP）。M:1kb以上的階梯型分子量標(biāo)準(zhǔn)。從越南收集來的南美白對蝦樣本（第一行，2014年樣本；第二行，2015年樣本）和來自泰國（3-5行，無特定病原體對蝦，排泄物和水），感染白肉病的斑節(jié)對蝦（第六行），感染阿米巴蟲的南美白對蝦（第七行），無特定病原體的南美白對蝦（第八行），鹵蟲生物樣本（第九行），無操作對照組（第十行）。 對蝦腸孢蟲病(EHP)在養(yǎng)殖對蝦中的傳播可能還會繼續(xù)，需要通過建立有效的方法來監(jiān)控這種寄生蟲的發(fā)病和傳播。所以通過用敏銳的分子生物學(xué)方法去檢測對蝦，活餌料和蝦塘環(huán)境的對蝦腸孢蟲病(EHP)會非常有效。感染對蝦腸孢蟲病(EHP）的對蝦通常不能被肉眼識別，因為EHP不會呈現(xiàn)臨床癥狀。本研究表明基于聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）和原位雜交（ISH）的檢測方法和診斷步驟具有具體性和靈敏性，可作為有效的常規(guī)診斷方法去檢測對蝦養(yǎng)殖群體，池塘環(huán)境和對蝦產(chǎn)品。
圖3：聚合酶鏈反應(yīng)生物檢測1，生物檢測2，以及shengwujiance3的肝胰腺樣本。（A）35天后檢測出共棲組存在EHP，但是不能檢測到水生感染組。（B）15天后，EHP在（嗜食同類）被檢測到。 相關(guān)鏈接： 世界頂級專家解讀對蝦肝腸胞蟲�。‥HP） 2015年10月，在加拿大舉辦的全球水產(chǎn)養(yǎng)殖聯(lián)盟對蝦專題會議上，EHP成為熱點話題，對蝦專家組的成員的成員也對EHP發(fā)表了各自的見解。 Expert：當(dāng)孢子找到合適的對蝦宿主，它就會減慢對蝦的生長速度，出現(xiàn)大小不一的情況，在一個發(fā)病的池塘，甚至?xí)霈F(xiàn)5個不同規(guī)格的對蝦和許多小蝦。 Expert：其實EHP最早影響泰國是在2011年前，比EMS還要早，我們看到產(chǎn)量大概下降了10%。 Expert：對于EHP，其實有一些比較有效的預(yù)防措施。首先，最關(guān)鍵的就是養(yǎng)殖密度，養(yǎng)殖密度越低，感染EHP的機率也越低。比如在印度，每平方米放20個苗(1.4萬/畝)的蝦塘比每平方米放50個苗(3.5萬/畝)的塘，能獲得更好的生長速度和規(guī)格更大的蝦。 第二個因素是坡度。低鹽度養(yǎng)殖感染EHP的機率較小，高坡度會增加感染的機率。 Expert：EHP的嚴(yán)重程度取決于其孢子在肝胰臟中的數(shù)目：孢子的數(shù)目越多，對生長的影響越大。孢子的數(shù)目與養(yǎng)殖的天數(shù)成正比，養(yǎng)殖的天數(shù)越長，孢子數(shù)目越多，特別是在養(yǎng)殖40天左右，會出現(xiàn)一個爆發(fā)的高峰期。 Expert：一旦發(fā)生感染，沒有已知的治療方法。孢子幾乎是堅不可摧的。一些業(yè)內(nèi)專家認(rèn)為，EHP孢子可以耐受長達50年的干燥，或200ppt的含氯消毒劑。因此，如果一個孵化場或者養(yǎng)殖場被感染，放養(yǎng)前一定要采取嚴(yán)厲的措施去消毒。 Expert：EHP能垂直傳播，如果親蝦感染了EHP，就會傳染給無節(jié)幼體和仔蝦。如果某個養(yǎng)殖區(qū)的某些池塘感染了EHP，其孢子會隨排進水系統(tǒng)進入未感染的池塘、孵化場。 預(yù)防對蝦腸孢子蟲病（EHP）的幾點建議 EHP在全世界范圍內(nèi)傳播已經(jīng)是既定事實了，特別是在亞洲的中國、馬來西亞、泰國、印尼和越南，已經(jīng)成為重災(zāi)區(qū)，與些同時，印度和墨西哥也先后發(fā)現(xiàn)了EHP(詳情請查看《泰國卜蜂：對蝦腸孢子蟲病(EPH)成為對蝦業(yè)的另一威脅》)。EHP主要是感染對蝦的肝胰腺從而破壞組織吸引營養(yǎng)的能力，從而導(dǎo)致生長緩慢。但是它還有一個很顯著的特點，生長緩慢但不會造成大量的死亡，這點起碼從心靈上獲得一些安慰，養(yǎng)殖戶不致于顆粒不收，看著長不大，馬上賣掉，組織下一茬生產(chǎn)為妙。 雖然知道有EHP這個東西，但是它的寄主還不清楚是什么，現(xiàn)在也沒有有效的方法處理EHP，大環(huán)境下想要完全阻斷它也是不可能的事。最好的方法就是盡量減少EHP進入池塘，同時控制它在池塘里的數(shù)量水平。 據(jù)說曾經(jīng)從中國進口過活餌和活蝦的養(yǎng)殖區(qū)都發(fā)現(xiàn)了EHP，中國又中槍了。 診斷
EHP可以用PCR或環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)(LAMP)來檢測，據(jù)說也可以用光學(xué)顯微鏡來檢測，但是需要有非常好的眼力才能看到這個小東西。如果對每一個親蝦都實行檢測，這個成本就非常高了，有些污染嚴(yán)重的地方就基本就沒有不帶病源的活體，檢測的結(jié)果肯定是讓人沮喪的。 預(yù)防方法 有相關(guān)的人員稱，其它種類的微孢子蟲可以通過藥物來處理，但是EHP似乎對這些藥物不敏感，因為它攻擊特殊的組織。所以也只能通過一些其它的策略來預(yù)防了。第一，育苗生物安全;第二，嚴(yán)格的清塘處理;第三，加強池塘管理。 育苗生物安全 池塘蓄養(yǎng)的親蝦，特別是投喂感染EHP的活餌的，感染EHP的機率會非常高，因為EHP能通過糞便傳播。只要用沙蠶、蛤肉、魷魚和本地豐年蟲飼養(yǎng)的親蝦，感染EHP的風(fēng)險都會升高。如果必須使用活餌，建議還是經(jīng)過冷凍、巴氏消毒或者X射線消毒以后再使用。 親蝦的培育池一定要清洗干凈，完全干燥，然后用氫氧化鈉消毒。所有的設(shè)備包括氣管水管，容器都要在2.5%的氫氧化鈉溶液中浸泡至少3個小時。浸泡完以后剩下的氫氧化鈉溶液要沖走，不要留著它用了。經(jīng)過浸泡設(shè)備要充分涼干，在使用它們之前用200ppm、PH低于4.5的鹽酸噴洗處理。EHP有非常強的耐受力，想通過以上的處理方法把它完全干掉有點難度，但是我們的主要目的不是要消滅它，而是要減少它的數(shù)量水平。 清理蝦卵和無節(jié)幼體：相關(guān)的育苗人員說，用適合濃度的碘或甲醛溶液能減少EHP附著于卵和無節(jié)幼的風(fēng)險，同樣這種方法也可以控制其它的細(xì)菌傳播，比如EMS。 嚴(yán)格的池塘清塘處理 池塘的有機質(zhì)越多，患微孢子蟲的風(fēng)險越高，這可能與微孢子蟲的中間寄主的生活環(huán)境有關(guān)。因此在放苗前，還是建議要徹底地清塘消毒為妙。具體的做法就是徹底清淤了，還用就是用強堿性的消毒物質(zhì)如氫氧化鈉，生石灰等處理塘底，使池塘底部的PH達到12，這樣能有效殺滅大部分的微孢子蟲。 推薦了一個有效的方法：每畝地用400公斤以上的生石灰處理塘底，然后塘底要完全曬干。有條件的養(yǎng)殖戶翻耕塘底10厘米左右，使生灰與底泥充分混合，然后加水使生石灰作用，如果操作得當(dāng)，塘底的PH值能達到12，并用保持一段時間，可以有效殺滅微孢子蟲。(PS.這個操作工程量相當(dāng)大)。 加強池塘管理 底層淤泥清除以后，建議用一些生物制劑(如菌)去處理底質(zhì)，可單獨使用，也可以帶水使用，主要的目的是降解底層的有機質(zhì)，從而破壞EHP的生長環(huán)境，經(jīng)常性合理地使用分解能力強的菌來處理有機質(zhì)變得致關(guān)重要。 關(guān)于EHP檢測的一些建議 光學(xué)顯微鏡可以用于鏡檢EHP，但起碼用40倍的物鏡，如果要確診，那就得用100倍物鏡。鏡檢要用肝胰臟的組織涂片或者組織切片。這是個技術(shù)活，需要相當(dāng)?shù)难哿�。如果鏡檢的樣品里的微孢子蟲還不是成熟的個體，那也很難分辨了來。這種方法需要花費很多時間和精力。 因此PCR檢測仍然是首選，最好選取肝胰臟的組織，如果是巢式PCR，使用對蝦的糞便也可以。
【關(guān)鍵字】：對蝦 對蝦腸胞蟲病 水產(chǎn)養(yǎng)殖 |
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