文/圖 廣州利洋水產(chǎn)科技股份有限公司 譚鮮英 張文文 戚瑞榮 煙臺大學(xué)陳營 在筆者團(tuán)隊的檢測中，共發(fā)現(xiàn)6個PirAB型副溶血弧菌的分離菌株對所有試驗藥物產(chǎn)品均不敏感，即俗稱的超級細(xì)菌。雖然出現(xiàn)的數(shù)量少，但在對蝦疾病的防治中應(yīng)給予足夠的重視，否則一旦發(fā)病或蔓延擴(kuò)散，將沒有抗生素類產(chǎn)品可用 利洋公司自2014年開始進(jìn)行對蝦致病性副溶血弧菌的流行病學(xué)調(diào)查、病原菌的分離、PirAB毒素基因的PCR檢測、毒力菌株的藥敏試驗等，為對蝦的養(yǎng)殖生產(chǎn)實(shí)踐提供了科學(xué)的理論指導(dǎo)。在我們的檢測中，共發(fā)現(xiàn)6個PirAB-Vp分離菌株對所有試驗藥物產(chǎn)品均不敏感，即我們俗稱的超級細(xì)菌。雖然出現(xiàn)的數(shù)量少，但在對蝦疾病的防治中應(yīng)給予足夠的重視，否則一旦發(fā)病或蔓延擴(kuò)散，將沒有抗生素類產(chǎn)品可用。 一、材料和方法 1、病蝦和水樣的采集 在養(yǎng)殖南美白對蝦發(fā)病時，采集病蝦的肝胰腺的和水樣，接種TCBS平板。然后，送利洋公司研究所進(jìn)行PirA毒素基因的PCR檢測，并對陽性菌株做藥敏試驗分析。 2、病蝦和水體的PirAB-Vp檢測 挑取TCBS平板上的單菌落或轉(zhuǎn)接的過夜培養(yǎng)物，煮沸制備細(xì)菌基因組模板，采用PCR方法進(jìn)行副溶血弧菌和PirA毒素基因的檢測。 3、藥敏試驗 對經(jīng)過PCR檢測陽性的PirAB-Vp菌株，采用紙片法進(jìn)行藥敏試驗，通過測量濾紙片周圍出現(xiàn)的抑菌圈的大小，衡量其對所試藥物的敏感程度。所試藥物為公司的9種抗生素類產(chǎn)品，通過實(shí)驗確定適當(dāng)?shù)乃幬餄舛炔⒆孕兄苽渌幟艏埰志χ睆絛≦14mm即為不敏感或耐藥。 二、結(jié)果 1、對蝦PirAB-Vp菌株中水產(chǎn)超級細(xì)菌的發(fā)現(xiàn) 今年二季度，從對蝦肝胰腺和養(yǎng)殖水體中共檢出261株P(guān)irAB-Vp，對其中的108株分離菌進(jìn)行了藥敏試驗分析，共發(fā)現(xiàn)6株菌對全部所試藥物（產(chǎn)品）不敏感或耐藥，表現(xiàn)為完全的耐藥性，見表1。對蝦PirAB-Vp分離菌株對常用的水產(chǎn)藥物均耐藥，呈現(xiàn)水產(chǎn)超級細(xì)菌的特征。在抑菌圈里生長的稀疏菌落，是典型耐藥菌株的表現(xiàn)，見圖1a。而同時從采集的樣本中分離的對照菌株，在藥敏試驗中出現(xiàn)清晰的抑菌圈，見圖1b。 2、對蝦PirAB-Vp毒力與耐藥性之間的關(guān)系 在江蘇、海南、廣東三個地區(qū)的PirAB-Vp分離菌株中，均發(fā)現(xiàn)超級耐藥的水產(chǎn)副溶血弧菌，而且肝胰腺和水體都有超級耐藥菌株分離。經(jīng)pirA毒素基因檢測，本文中6株全部耐藥的菌株均為攜帶PirAB毒素基因的副溶血弧菌，即PirAB-Vp菌株。在二季度我們共檢出261株P(guān)irAB-Vp，同時也檢出45株攜帶PirAB毒素基因的非副溶血弧菌。但未在PirAB非副溶血弧菌和不攜帶PirAB毒素基因的對蝦弧菌中發(fā)現(xiàn)全部耐藥的超級細(xì)菌，見表2。 三、討論 1、對蝦PirAB副溶血弧菌超級細(xì)菌出現(xiàn)的意義 對蝦致病性副溶血弧菌是一個特殊的菌株，完全不同于從臨床上和環(huán)境中分離的菌株，相關(guān)的藥敏試驗分析報道很少。在的日常檢測中，我們發(fā)現(xiàn)了6株對多種水產(chǎn)常用抗生素完全耐藥的PirAB-Vp菌株，即水產(chǎn)超級細(xì)菌。如果這樣的菌株引起對蝦發(fā)病或在水產(chǎn)養(yǎng)殖系統(tǒng)中大量繁殖，將沒有可用的藥物去控制和治療。雖然發(fā)現(xiàn)超級細(xì)菌的數(shù)量少，但涵蓋廣東、海南、江蘇三個地區(qū)，這樣生態(tài)上的廣范分布，可能會預(yù)示今后其出現(xiàn)的幾率更大、范圍更廣，隨之帶來的生物安保防控問題也會加大。提示我們在今后對蝦疾病的防控中，要注意內(nèi)外兼顧，科學(xué)施治，切斷病原菌流行和傳播的途徑，控制疾病的發(fā)生和發(fā)展。 2、對蝦PirAB副溶血弧菌耐藥性產(chǎn)生的機(jī)制 細(xì)菌的耐藥性多由質(zhì)粒攜帶，在環(huán)境不利條件脅迫時，耐藥質(zhì)粒在群體間加速轉(zhuǎn)移，使得耐藥菌株被選擇出來而成為群落中的優(yōu)勢種群。而多個耐藥質(zhì)粒或基因同時出現(xiàn)在一個菌株的細(xì)胞內(nèi)，這可能是出現(xiàn)超級細(xì)菌的主要原因。其次，因為每種藥物的殺菌機(jī)制及菌株的耐藥機(jī)制均不相同，同時出現(xiàn)對所有藥物耐藥的幾率極低。但如果細(xì)菌的某些通用機(jī)制發(fā)生改變，如細(xì)菌細(xì)胞膜上負(fù)責(zé)轉(zhuǎn)運(yùn)藥物的外排通道開啟，使得藥物不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用，會造成對所有試驗藥物均不敏感，這個機(jī)制更有可能是超級細(xì)菌出現(xiàn)的原因。 關(guān)于耐藥菌株的來源，目前還不清楚。推斷池塘底泥中、附著物上、水生生物體內(nèi)都可能是耐藥菌株的來源，進(jìn)而通過水體、附著物、水生生物傳播，造成超級細(xì)菌的流行和擴(kuò)散。 3、對蝦PirAB副溶血弧菌毒力與耐藥性之間的關(guān)系 毒力和耐藥的出現(xiàn)往往具有相關(guān)性，兩者多由質(zhì)粒攜帶，受環(huán)境壓力的脅迫，質(zhì)粒在細(xì)菌群落中出現(xiàn)轉(zhuǎn)移，帶有毒力的菌株往往同時帶有耐藥性，使其在生態(tài)系統(tǒng)中具有競爭的優(yōu)勢，更容易侵入宿主體內(nèi)而致病。最新的研究證實(shí)，PirAB-Vp攜帶一個約69kb的大質(zhì)粒，在質(zhì)粒上有兩個與昆蟲致病相關(guān)的毒素基因PirA和PirB，它們分別編碼一個13kDa和50kDa的外毒素蛋白并分泌到周圍環(huán)境中。我們的檢測發(fā)現(xiàn)，完全耐藥菌株只在PirAB-Vp中出現(xiàn)，未在PirAB非副溶血弧菌和不攜帶pirAB毒素基因的弧菌中發(fā)現(xiàn)。雖然，對蝦PirAB-Vp中出現(xiàn)超級細(xì)菌的機(jī)制尚不能明確。但是，可以確定PirAB-Vp中出現(xiàn)多種耐藥的超級細(xì)菌與其攜帶的毒力基因大質(zhì)粒有一定的相關(guān)性。而且，兩者之間是否存在必然的聯(lián)系值得進(jìn)一步研究。  【關(guān)鍵字】：PirAB型 副溶血弧菌 超級細(xì)菌 對蝦 養(yǎng)殖業(yè) 災(zāi)難 水產(chǎn)養(yǎng)殖 |
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