各類維生素缺乏或比例失調，以及礦物元素不足和失衡會對魚類肝臟正常代謝造成不良影響，而草魚肝膽病的發生通常與飼料有關，甚至是首要因素
□文/西南大學水產動物繁育和健康養殖研究中心 江海燕 鄭宗林 吳宇 張宗祥
拜耳（四川）動物保健有限公司劉濤 姚瑞清
草魚肝膽病的發生通常與飼料有關，甚至是首要因素。目前投喂的人工配合飼料的蛋白質含量大多在24-30％之間，粗纖維含量一般小于12％。蛋白質的大量攝入，促進了草魚的快速生長。雖然滿足了營養需求，但草魚腹部呈膨大狀，體形粗而短，與食草草魚相比胸圍與體長之比偏大，失去了早先固有的細長條的優美體態。另外部分蛋白質在魚體內被轉化成了脂肪，堆積在腸系及肝部周圍，加重了肝臟的負擔，直至形成脂肪肝；另一方面，人工配合飼料由于經過高溫高壓蒸煮后，原料中所含的維生素等破壞損失較多，各類維生素缺乏或比例失調，以及礦物元素的不足和失衡同樣會對肝臟的正常代謝功能造成不良影響和損害。本試驗擬在草魚飼料中補充一定量的以礦物元素為主要有效成分的魚類促長保肝類產品—拜水安（BSA），判定其對草魚生長和肝臟的保護效果。
1、材料與方法
1.1試驗魚及試驗設計
試驗用草魚（Ctenopharyngodon idellus）為當年人工繁殖的同一批苗種，購自重慶市榮昌縣梅石壩漁場，試驗在西南大學水產系室內循環養殖系統中進行。試驗前暫養1周，試驗采用的養殖設施為長方形玻璃缸（總體積0.4m3，水體體積0.3m3）。養殖試驗期間均連續充氧（除投餌期間外）。試驗開始前停飼24 h，選擇體重相近(30.0±1.5)g，體格健壯的草魚魚種600尾，隨機分配于15個養殖缸，每缸40尾。試驗分5個處理組，分別為陽性對照組、陰性對照組、BS1組（BSA500g/t飼料）、BS2組（BSA1000g/t飼料）和BS3組（BSA2000g/t飼料）。每天早、中、晚投喂3次，至飽食，投喂結束后30min，吸出池內殘餌及糞便。試驗期間水溫25.0±1.0℃，pH7.5±0.5，溶氧≥5mg/L，氨氮<0.2mg/L，余氯<0.1mg/L，養殖試驗共進行56天。
試驗前預先測定草魚96h的Cu2+半數致死濃度(LC50)，本試驗條件下的96h LC50為(0.82±0.13)mg·L-1，根據LC50設計Cu2+含量梯度再進行藥物性肝病造模試驗，選擇肝病現象明顯、酶學指標變化顯著的0.21mg·L-1(Cu2+含量)作為肝病模型的造模濃度。養殖第3周，將陽性對照、BS1、BS2和BS3組的草魚浸浴于0.21mg·L-1 (Cu2+含量)的硫酸銅液體中4天，每天換液以保證溶液濃度。硫酸銅浸浴期間，飼料投喂暫停，間歇充氧，浸浴結束后，置于無硫酸銅的水體中飼養至第8周試驗結束。
1.2試驗飼料
配制飼料前，飼料原料均經粉碎機粉碎并全部過60目篩，制成直徑為1.5mm左右的顆粒飼料，在30℃鼓風干燥箱內干燥24 h，置冰箱0℃保存。“拜水安（BSA）”產品由拜耳（四川）動物保健有限公司提供。具體配方組成和營養成分分析見表1。
1.3 指標測定
8周養殖試驗結束后，按如下要求或規程測定相應的生長、胃腸酶活性和肝酶指標等。
1.3.1 生長速度
鮮重魚質量變化、增重率和特定生長率等表示生長速度。
1.3.2 飼料利用效率
以飼料系數和蛋白效率表示。
1.3.3 全魚營養成分測定
試驗結束每處理組取9尾魚，進行全魚營養成分分析。魚體肌肉常規成分分析均用AOAC方法。其中水分采用105℃烘箱干燥恒重法，粗蛋白質采用凱式定氮法（總氮×6.25），粗脂肪采用索氏抽提法(以乙醚為抽提液)，粗灰分采用馬福爐中灼燒法(550℃)。
1.3.4 形體指標
以肥滿度、內臟指數（內臟重與體重比）、肝胰指數（肝胰臟重與體重的比）等指標對魚體形態進行評價。
1.3.5 消化酶活性測定
脂肪酶活性測定：采用聚乙烯醇橄欖油乳化液水解法；蛋白酶活性測定：采用福林-酚試劑法。
1.3.6 肝臟抗氧化活性測定
4℃條件下，肝臟樣品經離心（600×g）后，取上清液用于各指標測定。采用南京建成生物技術研究所的試劑盒測定超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、丙二醛（MDA）和溶菌酶（LSZ）的含量或活性。
1.3.7 肝組織顯微病理學研究
在冰盤中剖殺試驗草魚，取肝臟，Bouin`s液固定，石蠟包埋，切片5 μm，HE染色，光鏡觀察。
1.4 試驗數據的統計分析
采用SPSS13.0 統計軟件對數據進行統計學分析，先對數據作單因素方差分析(ANOVA)，處理間若有顯著差異，再作Duncan’s多重比較，P<0.05表示差異顯著。
2、試驗結果
2.1 對生產性能的影響
草魚經硫酸銅肝病造模之后，陽性對照組的草魚增重率、特定生長率、蛋白效率和成活率最低，顯著低于陰性對照組和BSA補充組（P<0.05），且隨著BSA添加量的增加，各指標都有提高趨勢；但除BS3組的增重率比陰性對照顯著提高外（P<0.05），其余各BS組的增重率、特定生長率、蛋白效率和成活率與陰性對照無顯著差異（P>0.05）。BS組與陰性對照組之間的草魚飼料系數無顯著差異（P>0.05），但均顯著低于陽性對照組（P<0.05）（表2）。
2.2 對全魚營養成分和肝脂的影響
肝病造模及BSA對全魚粗脂肪和水分都沒有顯著影響，但BSA對全魚粗蛋白含量較陽性對照組顯著提高（P<0.05）。肝病造模后的陽性對照的肝脂含量顯著高于其余各組，而BSA的補充顯著降低了肝脂含量（P<0.05）（表3）。
2.3 對草魚形體的影響
陽性對照的肥滿度顯著低于陰性對照和BS組（P<0.05），且隨著BSA的增加，肥滿度有提高趨勢，但除BS3組的肥滿度比陰性對照顯著提高外（P<0.05），其余各BS組的肥滿度與陰性對照無顯著差異（P>0.05）。陽性對照的草魚肝體指數和內臟指數顯著高于陰性對照和BS組（P<0.05），但BS組與陰性對照無顯著差異（P>0.05）（表4）。
2.4 對草魚肝酶的影響
試驗以草魚肝臟超氧化物歧化酶（SOD）和過氧化氫酶（CAT）活性，及丙二醛（MDA）生成量來判定其抗氧化性能（表5）。肝病造模和BSA的補充對草魚肝CAT活性無顯著影響（P>0.05），而肝病造模導致陽性對照草魚肝MDA生成量和SOD活性比陰性對照和BSA補充組顯著提高（P<0.05）；補充BSA后，草魚肝谷丙轉氨酶（GOT）、谷草轉氨酶（GPT）和溶菌酶（LSZ）活性比陽性對照有顯著降低，比陰性對照略有提高。
2.5 對草魚胃腸消化酶的影響
陰性對照組的草魚前腸和中腸的蛋白酶活性與陽性對照組和BS組間均無顯著差異（P>0.05），后腸和胃蛋白酶活性隨BSA的補充有明顯的上升趨勢，其中BS3組的后腸和胃蛋白酶活性顯著高于兩個對照組（P<0.05）（表6）。
BSA的補充提高了草魚腸道脂肪酶的活性，BS3組的草魚前、中和后腸脂肪酶活性比對照組都有顯著提高（P<0.05），但各組間胃脂肪酶活性無顯著差異（P>0.05）（表7）。
2.6 BSA對草魚肝臟的影響
用硫酸銅造肝病模型后，陽性對照組草魚肝組織糜爛，壞死，肝細胞崩解，細胞核消失（見后插彩頁圖2）；陰性對照組草魚肝細胞索結構完整，肝細胞排列整齊，細胞結構較清晰（見后插彩頁圖3）；同樣肝病造模后，在BS1組草魚肝細胞變得相對正常，但肝細胞索結構發生變異，結構不完整（見后插彩頁圖4）；BS2組草魚肝細胞結構完整，但排列不夠整齊，肝細胞有輕微病變，部分扭曲（見后插彩頁圖5）；BS3組草魚肝細胞結構完整，胰島結構清晰完整，細胞排列整齊（見后插彩頁圖6）。
3、小結
3.1 BSA對草魚生產性能的影響
試驗第3周草魚進行肝病造模后，與未肝病造模（陰性對照）相比，造模組（陽性對照）的各項生長性能指標均顯著降低，飼料利用率下降。在肝病造模的情況下，草魚飼料中補充BSA（500-2000g/t飼料）后，其生長性能各項指標均有顯著改善，甚至BS3組的草魚增重率、蛋白效率等較陰性對照（未造模）還有顯著提高。
3.2 BSA對草魚全魚營養成分和肝脂的影響
肝病造模及飼料中補充BSA對草魚全魚粗脂肪和水分無顯著影響，但卻顯著降低了全魚蛋白的含量，并顯著增加了肝脂的含量。
3.3 BSA對草魚形體的影響
草魚進行肝病造模后，其肝胰指數和內臟指數均比陰性對照組顯著提高，且肥滿度降低；但補充BSA后，其肥滿度得到顯著提高，肝胰指數和內臟指數都有顯著下降。
3.4 BSA對草魚肝酶的影響
CAT活性未受肝病造模和BSA補充的影響；而肝病造模導致陽性對照組草魚肝MDA生成量和SOD活性比陰性對照組和BSA補充組顯著提高；補充BSA后，草魚肝GOT、GPT和LSZ活性比陽性對照有顯著降低，比陰性對照略有提高。
3.5 BSA對草魚胃腸消化酶的影響
肝病造模后，與陽性對照組相比，BSA的補充顯著增加了草魚胃和后腸的蛋白酶活性，同時對腸道的脂肪酶活性也有顯著提高。
3.6 BSA對草魚肝臟形態結構影響
組織切片結果表明，肝病造模引起草魚肝臟較嚴重的損傷，但飼料中補充BSA后，對肝病的恢復有顯著的作用。
4、結論
飼料中補充BSA（500-2000g/t飼料）后，可促進草魚生長性能和飼料效率的提高，并對肝臟有較明顯的保護作用。
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