西伯利亞鱘（♀）×史氏鱘（♂）反季節人工繁殖試驗

李達付

西伯利亞鱘♀×史氏鱘♂

反季節人工繁殖試驗

2009級水產養殖學專業  李達付　

（西昌學院動物科學學院，四川 西昌  615013）

【摘  要】通過對溫度的調控，使（7-9）齡西伯利亞鱘雌魚和7齡史氏鱘雄魚性腺在非繁殖季節發育成熟。在15.8℃條件下利用LRH-A2+DOM催產親魚，采用一針法催產雄魚，獲得精液后再用二針法（針間距12h）催產雌魚，催產劑量為雄魚的2倍，催產效應時間為24-42h。對催產后的親魚人工擠卵、采精和人工授精，采用滑石粉使受精脫粘，然后放入孵化瓶內流水孵化。第一次催產雌魚9尾，其中3尾產卵，共獲成熟魚卵165000粒，獲受精卵96000粒，獲水花魚苗54000尾，催產率33.33％、受精率58.18％、孵化率56.25％。一個月后第二次催產雌魚8尾，其中6尾產卵，共獲成熟魚卵258000粒，獲受精卵120000粒，獲水花魚苗58000尾，催產率75％、受精率46.51％、孵化率48.33％。

【關鍵詞】西伯利亞鱘  史氏鱘  反季節  雜交  人工繁殖

    雜交優勢種往往具有病害少、生長快、肉質優等特點，西伯利亞鱘（♀）×史氏鱘（♂）（下文簡稱反雜交）具有上述特點，是有養殖前景的新品種。反雜交成魚價格合理，市場前景好，市場需求量大。反雜交后代生長快，個體大，成熟度系數最高可達15％，因此是適合黑魚子醬加工的品種。反雜交對環境適應能力強，適合引種到多地進行養殖。山東泗水縣虹鱒魚良種場對史氏鱘♀×西伯利亞鱘♂（下稱兩雜交）、小體鱘♀×史氏鱘♂（下稱小雜交）、史氏鱘♀×國外雜交鱘♂（下稱三雜交）、史氏鱘♀×俄羅斯鱘♂（下稱俄羅斯雜交）、西伯利亞鱘♀×史氏鱘♂（下稱反雜交）、西伯利亞鱘♀×達氏鰉♂（下稱大雜交），進行了網箱養殖對比試驗，通過綜合分析后，得出幾種雜交鱘的網箱養殖優劣順序為:兩雜交＞反雜交＞大雜交＞小雜交＞俄羅斯雜交＞三雜交。其中反雜交具有生長速度快、養殖成活率高、受病害影響小、銷售情況好、運輸成活率高等優點[1]。

目前尚未見西伯利亞鱘（♀）×史氏鱘（♂）人工繁殖的報道，而對西伯利亞鱘純種人工繁殖和史氏鱘純種人工繁殖的報道也較少，羅剛和曲秋芝等研究并報道了西伯利亞鱘的人工繁殖[2-3]，張修鍵和劉鍵等研究并報道了史氏鱘人工繁殖[4-5]。鱘形目魚類反季節人工繁殖的報道也很少，潘偉志和周風劍等研究并報道了史氏鱘反季節人工繁殖[6-7]。鱘形目魚類人工繁殖的相關書籍較多，有謝忠明主編的鱘魚養殖技術[8]；劉家壽和胡傳林編著的鱘魚適用養殖技術[9]；四川省長江水產資源調查組編著的長江鱘魚類生物學及人工繁殖研究[10]；曹克駒主編的名特水產動物養殖學[11] 。本試驗主要為西伯利亞鱘（♀）×史氏鱘（♂）的繁殖生物學積累資料，為西伯利亞鱘（♀）×史氏鱘（♂）的繁殖生產提供數據參考，此次試驗可為同仁在做西伯利亞鱘（♀）×史氏鱘（♂）研究時提供參考資料。

李達付

1 材料與方法
1.1 試驗時間與地點
    試驗分為兩次進行，第一次試驗時間為2012年11月30日至2012年12月11日，第二次試驗時間為至2012年12月27日至2013年1月7日。在四川涌泉珍稀魚養殖有限公司廣漢基地進行親魚前期培育，在峨眉山腳下高橋鎮清音冷水魚處進行親魚冬馴培育，在四川涌泉珍稀魚養殖有限公司峨眉基地暫養后進行催產試驗，并在四川涌泉珍稀魚養殖有限公司峨眉基地進行受精卵孵化。
1.2 試驗材料
1.2.1 試驗親魚
    試驗動物為西伯利亞鱘（♀）和史氏鱘（♂），由攀枝花跨越水產養殖有限公司和彭州涌泉冷水漁業有限公司提供。第一次試驗選擇雌魚9尾，其中7號親魚為9齡，其余為7齡，第二次試驗選擇雌魚8尾，所有親魚均為7齡。兩次試驗用親魚體重均為6-10kg。
1.2.2 試驗器材
　　　顯微鏡、洪騰條碼器、孵化瓶、手術刀、手術鉗、直尺、電子秤、傷口縫合針、注射器、取卵器、親魚培育池、催產池、暫養池、魚苗培育池等。
　　　孵化瓶高55cm，孵化瓶直徑13cm，底部有一半徑為6.5cm的半球形凹槽，底部凹槽內架設進水管，進水管與三塊互成120º的支撐片連接。支撐片與進水管連接處，支撐片沿管口下沿0.8cm，保證進水管的管口與凹槽的底部之間有一定的空隙，瓶的上部離頂5cm處有一開口，開口在瓶外連有一段細管，細管導水入一導流管，導流管連接一大的暫養盆。
　　　洪騰條碼器為親魚編號用。
　　　清音冷水魚處的親魚培育池為八邊形，長邊長14m，短邊長2m，小邊1.41m，水深1.2m。四川涌泉珍惜魚養殖有限公司峨眉基地的親魚暫養池也為八邊形，正邊長2m，角邊長1.41m，水深0.5m。催產池也為八邊形，長邊長2.5m，角邊長0.4m，水深0.5m。
　　　魚苗暫養池為圓柱形盆，半徑為1m，高60cm，圓心處有一10cm的孔，孔上插水管以控制盆內水位。管用外連網衣的焊接鋼架籠隔離，另外鋼架網衣籠與盆的底部連接處用海綿連接。
1.2.3 試驗用水
    親魚培育階段，各個基地的用水如下：四川涌泉珍稀魚養殖有限公司廣漢基地的用水為涌泉水與地下水的混合地下水；清音冷水魚處的用水為河流水；親魚暫養、受精卵的孵化和魚苗暫養用水，為四川涌泉珍稀魚養殖有限公司峨眉基地的地下暗河水。
1.3 試驗方法
1.3.1 親魚培育
　　　2013年3月至2012年10月，將符合標準的繁殖用親魚，在四川涌泉珍稀魚養殖有限公司廣漢基地進行前期培育。2012年10月26日（此時廣漢基地水溫降至17℃左右）將繁殖用親魚移到峨眉山腳下高橋鎮清音冷水魚處進行冬馴培育1個月，冬馴水溫8-10℃。2012年11月26日，從冬馴的親魚中挑選出成熟度較好的9尾親魚運往四川涌泉珍稀魚養殖有限公司峨眉基地暫養，等待催產。
　　　整個親魚培育階段選用鳳凰牌3.0鱘魚料培育。前期培育按親魚體重的1.5％投喂，保證親魚的懷卵量。冬馴培育投喂量控制在親魚體重的0.5％左右。親魚在四川涌泉珍稀魚養殖有限公司峨眉基地暫養期間停止投喂。
1.3.2 雌雄鑒別與成熟度鑒定
　　　雄魚體表光滑，腹部較小，腹部較硬，性成熟的雄魚，用手輕壓生殖孔，有少許精液流出。
　　　雌魚體表粗糙，腹部柔軟且膨大。成熟雌魚腹部膨大，腹壁變薄，隱約可見腹腔的卵巢，腹部呈青瘀色，腹壁可見血管分布。
1.3.3 親魚催產
　　　雌雄親魚催產池分開，雄魚每池放2尾，雌魚每池暫養4尾，催產池中流量控制為1.2L/s。
　　　雄魚催產在雌魚催產前進行，用寧波第二激素廠生產的促黃體激素釋放激素類似物2號（LRH-A2）+馬來酸地歐酮（DOM）催產，采用一針法，注射劑量視親魚性成熟狀況。催產后，若雄魚表現出露背頂流逆水環游現象，則立即采集精液，并取樣在顯微鏡下觀察精細胞的活力。第一次試驗催產一尾雄魚并成功搜集到優質精液。第二次試驗共催產兩尾雄魚，第一尾雄魚催產效果較差，于是進行了第二尾雄魚的催產，成功搜集到優質精液。
　　搜集到強活力的精液后，即催產雌魚。雌魚催產藥物用LRH-A2+DOM，成熟度較好的親魚采用兩針法催產，針間隔12h。成熟度較差的親魚采用3針法催產，兩次針間隔也為12h。2012年12月1日進行第一次試驗，催產9尾雌性親魚（1-9號親魚），2012年12月27日進行第二次試驗，催產8尾雌性親魚（10-17號親魚）。
1.3.4 精液的采集與保存及成熟卵的采集
　　　將雄魚保定，利用一端管口磨去菱角的管徑為5mm大小的軟塑料管探入雄魚生殖孔4cm左右，塑料管的另一端接入專用的儲存精液的塑料袋，雄魚自行排精。對采集到的精液進行鏡檢，對活力差的精液棄之不用，對活力好的精液進行保存。精液的保存采用了兩種辦法，一種方法是4℃冰箱內低溫保存。另外一種保存方法，置于干燥避光處常溫保存。兩種保存方法的精液都裝在特定的塑料袋內，袋內充氧，在保存過程中，塑料袋內的氧氣每24h換一次。
　　　在雌性親魚暫養池外緊貼外壁放一用鋼絲固定邊緣的80×80 cm²的密網片，當發現網片上散落有魚卵便可對暫養池內親魚進行檢查并采卵。
　　　為了盡可能的采盡鱘魚腹腔內的成熟魚卵，采用腹部底端創口采卵法。采卵過程中保持雌性親魚體表干燥。用生理鹽水清洗雌魚的腹腔兩次，把粘附在腹腔壁上的魚卵洗出。采完魚卵后，用手術鉗將被擠出的卵巢組織送回腹腔，然后對采卵創口進行縫合。最后，給予采卵后的親魚注射鹽酸慶大霉素。整個過程在10分鐘以內完成。
1.3.5 魚卵受精與脫粘
    以半干法受精3min，每10000粒成熟魚卵用5ml精液，受精前需用顯微鏡檢查精細胞活力。完成受精后，用清水清洗受精卵2次。魚卵受精后5min產生粘性，大約在受精后15min粘性最強。用過400目篩娟網的20％的滑石粉脫粘40min-60min，脫粘40min后用網片檢查魚卵的脫粘情況，若粘性仍然較強，再繼續脫粘，直至粘性不強。
1.3.6 受精卵的孵化
　　　受精卵經脫粘后在孵化瓶內孵化，孵化密度以每個孵化瓶40000粒魚卵，到后期時，把孵化密度減小到每個孵化瓶20000魚卵。孵化用水的水量控制在水流帶動孵化瓶內受精卵上下來回翻動為好，孵化過程中用一根塑料管利用虹吸法將上層的各種壞卵吸出。孵化管理過程中，及時分瓶。對入瓶后出現粘瓶現象的魚卵，用羽毛將粘在瓶壁上的魚卵掃落下來，讓其翻動孵化。加強巡視以防止滿水跑卵，防止進水管堵塞造成孵化瓶內魚卵缺氧死亡。
1.3.7 數據統計
催產率=產卵雌魚尾數/催產雌魚尾數×100％[12] …………①
受精率=受精卵數/總卵數×100％………………………….②
孵化率=初孵仔魚數/受精卵數×100％…………………….③
畸形率=畸形仔魚數/初孵仔魚數×100％………………….④
相對繁殖力=懷卵量/魚體重（g）[13] ………………………⑤
    催產率、受精卵、孵化率、畸形率和相對繁殖力分別用公式①、②、③、④和⑤計算。

李達付

2 結果與分析
2.1 催產情況
　　　第一次試驗1號親魚成熟度較好，采用的是2針法催產，其余8尾親魚成熟度較差，采用的是3針法催產。其中順產3尾，催產率33.33%。詳見表1
　　表1 第一次試驗催產情況
親魚編號        1        2        3        4        5        6        7        8        9
親魚體重（kg）        6        9        7        10        9        7        6        9        8
效應時間（h）        24        7.5        12.5        未產        未產        未產        未產        未產        未產
產卵量(萬粒)        4.5        7        5                                               
相對繁殖力（粒/g）        7.5        7.78        7.14                                               
　　　第二次催產全部采用2針法催產。其中順產6尾，催產率75%。詳見表2
　　表2 第二次試驗催產情況
親魚編號        10        11        12        13        14        15        16        17
親魚體重（kg）        9        8        6        9        8        6        10        9
效應時間（h）        29.72        31.42        34        　36        38          42        未產        未產
產卵量(萬粒)        8        3.6        2.6        7                4.6               
相對繁殖力（粒/g）        8.89        4.5        4.33        7.78                7.67               
　　　綜合對比表1和表2中數據，第一次催產試驗的催產率（33.33%）明顯低于第二次催產試驗（75%），兩次試驗雌性親魚的相對繁殖力差異較大，且兩次試驗效應時間差異較大。第一次催產試驗的親魚冬馴時間為一個月，親魚性腺發育的同步性較低，故催產率較低。第二次催產試驗的親魚冬馴時間為2個月，親魚性腺發育的同步性較高，故催產率較高。由此可見冬馴在親魚培育過程中的必要性。第一次試驗雌性親魚的相對繁殖力差異小，親魚前期培育較好，故冬馴一個月便達到催產親魚的選擇標準。第二次試驗雌性親魚的相對繁殖力差異大，親魚前期培育不理想，故冬馴2個月才達到催產親魚的選擇標準。由此可見親魚前期培育的好壞會影響親魚冬馴的時間。第一次催產試驗的雌性親魚性腺發育較好，效應時間較短。第二次催產試驗的雌性親魚性腺發育較差，效應時間較長。三針法催產的親魚，先低劑量催熟后，再高劑量催產。其中用3針法催產成功的2號和3號親魚的效應時間分別7.5h和12.5h，相對于2針法催產的效應時間明顯縮短，說明3針法可以很好的催熟親魚，有利于催產。
2.2 受精、孵化情況
　　　其中14號親魚為彭州涌泉冷水漁業有限公司所有，除催產率參與結果統計外，其余數據均未參與統計。詳見表3
表3 魚卵受精情況與受精卵孵化情況
親魚編號        產卵量（萬粒）        受精卵量（萬粒）        受精率        出苗量（萬尾）        孵化率
1        4.5        3.8        84.44%        2.17        57.11%
2        7        5.8        82.86%        　　　　3.23        55.69%
3        5        0                       
10        8        6        75%        3.2        53.33%
11        3.6        2.5        69.44%        1.3        52%
12        2.6        1        38.46%        0.4        40%
13        7        2        28.57%        0.8        40%
15        4.6        0.5        10.87%        0.1        20%
表4 兩次試驗的平均數據
        催產親魚總數（尾）        順產（尾）        催產率        成熟魚卵總數（萬粒）        受精卵數（萬粒）        受精率        出苗數（萬尾）        孵化率
第一次試驗        9        3        33.33%        16.5        9.6        58.18%        5.3        55.21%
第二次試驗        8        6        75%        　25.8        12        46.51% 46.51% 46.51%        5.8        48.33%
　　　結合表1、表2和表3可知效應時間的長短影響魚苗的受精率和孵化率，效應時間越短，受精率和孵化率越高，反之則受精率和孵化率越低。效應時間主要受雌性親魚的成熟度影響，說明催產試驗親魚的性腺發育不良。孵化水溫15.8℃，119.25h開始破膜出苗，119.75h開始大量出苗。在以往的生產中，在同樣的孵化條件下，均未出現過各項指標偏低的現象。
2.3 畸形苗
　　　觀測到的畸形苗分頭部畸形、脊柱畸形、鰭畸形3種類型。
　　　頭部畸形分為額前缺刻（圖1）、吻端側偏（圖2）、雙頭（圖3）、單眼（圖4）和無眼（圖5）5種。
        
　  圖1 額前缺刻                  圖2 頭部側偏                圖3 雙頭魚
   
    圖4 單眼魚                  圖5 無眼魚
　　　鰭畸形分為單胸鰭（圖6）、尾柄下彎（圖7）、尾柄上翹（圖8）和無尾（圖9）4種。
        
   圖6 單胸鰭                    圖7 尾柄下彎              圖8 尾柄上翹

　　圖9 無尾鰭
　　　脊柱畸形分為脊柱弓形（圖10）、折疊彎曲（圖11）、盤蛇形彎曲（圖12）、脊柱w形（圖13）、脊柱s形（圖14）、Ω形彎曲（圖15）和△彎曲（圖16）共7種。
         
圖10 脊柱弓形彎曲            圖11 脊柱折疊形彎曲          圖12 脊柱盤蛇狀彎曲
         
圖13 脊柱w形彎曲             圖14 脊柱s形彎曲           圖15 脊柱Ω形彎曲
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　         （凹凸形彎曲)

  圖16 △彎曲
　　　畸形率未做詳細統計，第一次試驗的畸形苗大約為1.4萬尾，第二次試驗的畸形苗大約為1.3萬尾，第一次試驗畸形率為25.93％，第二次試驗畸形率為22.41％。
3 小結與討論
3.1 各項指標偏低原因分析
　　　試驗過程中的親魚按培育方案培育后，親魚的性腺能夠發育成熟，并且能夠成功催產、受精以及孵化，證明了方案的可行性。試驗中的催產率、受精率和孵化率均較低，主要是由于在親魚培育操作中，前期培育不理想，且冬馴培育不規范。由于前期選出最好的親魚在彭州涌泉冷水漁業有限公司冬馴過程中遭遇泥石流自然災害，全部死亡。在四川涌泉珍稀魚養殖有限公司試驗的親魚為較次的一批親魚，親魚的性腺發育不好。在選擇冬馴親魚時，沒有嚴格的制定選擇標準，只有當親魚的性腺發育到一定的時期時進行冬馴，才能獲得優質的魚卵。冬馴前的培育主要為親魚積累營養物質，若營養物質積累不足，親魚缺乏向卵巢轉化的營養物質，后期冬馴不能保證魚卵的質量。另外親魚冬馴的時間不夠，根據四川涌泉珍稀魚養殖有限公司的經驗，親魚的冬馴時間在50d以上較好，且經過冬馴后的親魚性腺發育的時期較為一致，有利于批量催產。冬馴的主要目的是讓親魚培育前期積累的營養物質向卵巢轉化，促進親魚性腺發育成熟。冬馴時間不足，營養向卵巢轉化不夠，魚卵質量較差。另外本試驗為種間雜交，受精過程有種間特異性，即卵子可以識別同源精子與異源精子，與同源精子結合，異源精子將受到嚴格限制[14]。故此試驗結果受精率較低。
3.2 畸形苗原因討論
　　　親魚的質量影響到魚卵質量，魚卵質量直接關系到魚卵的受精率、受精卵的孵化率以及畸形率，引發的畸形主要為頭部畸形、缺鰭和脊柱畸形等。引發畸形的原因較多，包括遺傳、環境和營養等[15]。本試驗全程為暗河水孵化，峨眉基地水源各項指標正常，以往年度的生產中未發生高畸形率現象。本次試驗過程中從未使用藥物，所以致畸的主要原因可能來自于營養。同各項指標偏低的原因，親魚前期培育不良，另外冬馴時間不足，兩因素共同導致了畸形苗的發生。
3.3 與親本純種人工繁殖比較
     已報道的親本純種人工繁殖較少，具有原始數據的報道，就只有曲高芝和高艷麗的西伯利亞鱘的人工繁殖。曲高芝和高艷麗進行了兩組人工繁殖試驗，iv組為13-14 ℃冬馴后的人工繁殖試驗，另外一組為7-8℃冬馴后的人工繁殖試驗。本人試驗與曲高芝和高艷麗7-8℃冬馴后的人工繁殖試驗均為低溫冬馴催產試驗，兩次試驗具有可比性。曲高芝和高艷麗7-8℃冬馴后的人工繁殖試驗組催產雌魚4尾，其中3尾產卵，催產率75℅，平均受精率92.47℅，平均孵化率66.27℅。而本人兩次試驗的平均數據為：催產率52.94℅，受精率48.73℅，孵化率39.77℅。對兩數據進行比較可知，本人的試驗各項數據指標都明顯低于曲高芝和高艷麗的西伯利亞鱘的人工繁殖試驗。原因可能來自于兩個方面，一是本人的試驗為反季節人工繁殖試驗，試驗親魚性腺發育狀況不理想，另外就是本人的試驗為種間雜交試驗，而曲高芝和高艷麗的試驗為西伯利亞鱘純種的人工繁殖試驗。
3.4 小結
　　　試驗過程中的親魚按培育方案培育后，親魚的性腺能夠發育成熟，并且能夠成功催產、受精以及孵化，證明了方案的可行性。試驗中的催產率、受精率和孵化率均較低，主要是由于在親魚培育操作中，前期培育不理想，且冬馴培育不規范，試驗方案還有許多不足，還需要改進。
參考文獻
[1]孫劍，劉傳忠等.幾種雜交鱘水庫網箱養殖對比試驗[J] .水產學雜志，2009，22（3）：47-50
[2]羅剛.西伯利亞鱘的生物學特性及其人工繁殖技術[J].畜牧與飼料科學,2011, 32(5):72,111
[3]曲秋芝,高艷麗.西伯利亞鱘的人工繁殖[J].中國水產科學,2005，12（4）:492-495
[4]劉鍵，趙德樹.史氏鱘的生物學特性及其人工繁殖技術[J].水利漁業，2006，26（1）：26-27
[5]張修鍵.史氏鱘人工繁殖試驗[J].河北漁業，2007，（5）：41
[6]周風劍，朱廣強等.史氏鱘秋季人工繁殖試驗[J].中國水產，2002，（6）：39
[7]潘偉志.史氏鱘人工催產技術即低溫早繁對策[J].水產學雜志，1999，12（2）：52-55
[8]謝忠明.鱘魚養殖技術[M] . 北京.中國農業出版社，2002
[9]劉家壽，胡傳林.鱘魚實用養殖技術[M] . 北京.金盾出版社，2003
[10]四川省長江水產資源調查組.長江鱘魚類生物學及人工繁殖研究[M] .成都.四川科學出版社，1988
[11]曹克駒.名特水產動物養殖學[M]. 北京.中國農業出版社，2004.95-105
[12]申玉春.魚類增養殖學[M]. 北京.中國農業出版社，2008，102
[13]蘇錦詳.魚類學與海水魚類養殖[M]. 北京.中國農業出版社，2008，314
[14]李霞.水產動物組織胚胎學[M] .北京.中國農業出版社，2006.218
[15]張濤，莊平等.人工養殖史氏鱘畸形原因探討[J].海洋漁業，2006，28（3）：185-189


附圖
      
附圖1 峨眉基地              附圖2 峨眉基地水源       附圖3 繁殖用親魚
      
附圖4 人工采卵                   附圖5 生理鹽水清洗          附圖6 創口縫合
                                     腹腔剩余卵粒
            
附圖7魚卵脫粘                附圖8 孵化裝置             附圖9 魚卵孵化
      
附圖10 清除各種壞卵             附圖11 破膜出苗        附圖12 受精卵孵化

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李達付

西伯利亞鱘（♀）×史氏鱘（♂）反季節人工繁殖試驗 圖片

黃建蓉jane

我暑假也要和老師做鱘魚的繁殖實驗，你還有詳細的繁殖資料嗎，我們老師想讓我們查閱么~

李達付

黃建蓉jane 發表于 2013-6-22 18:20
我暑假也要和老師做鱘魚的繁殖實驗，你還有詳細的繁殖資料嗎，我們老師想讓我們查閱么~

根據我做魚類繁殖的經驗，資料不可信，因為每個人做繁殖的生境不一樣，親魚培育情況不一樣，藥物的產地不一樣，等等各方面的差異，所以做別人的重復試驗，很容易做不出結果來。要做就要做自己的特色，有適合本地區的模式。