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flyjet 2016-7-12 23:40
水產養殖中弧菌的分離檢測 (TCBS 培養基與弧菌顯色培養基） TCBS 培養基分離弧菌 國標 GB4789.7-2013 食品微生物學檢測 副溶血性弧菌檢測 中 硫代硫酸鹽 - 檸檬酸鹽 - 膽鹽 - 蔗糖（ TCBS ）瓊脂配方： 酵母膏粉 5g ，蛋白胨 10g ，氯化鈉 10g ，檸檬酸鈉 10g ，硫代硫酸鈉 10g ，膽酸鈉 3g ， 牛膽粉 5g ，蔗糖 20g ，檸檬酸鐵 1g ，瓊脂 15g ，溴麝香草酚蘭 0.04g ，麝香草酚蘭 0.04g 最終 pH 8.6 ± 0.2 TCBS 瓊脂的原理就是發現蔗糖發酵產生酸的菌落，霍亂陽性，副溶血性弧菌陰性， 副溶血性弧菌 不發酵蔗糖，菌落呈藍綠色。 霍亂弧菌 發酵蔗糖產酸，菌落呈黃色。然后，這些有機酸，也被這種細菌利用，分解成二氧化碳揮發了，有機酸沒有了，菌落就重新變成綠色的了。 該培養基中的牛膽粉有抑制其他革蘭氏陽性菌的作用，與枸櫞酸鈉和硫代硫酸鈉合用時，對大腸桿菌有明顯抑制作用。同時枸櫞酸鈉和枸櫞酸鐵可使霍亂弧菌免受其他抑菌劑的作用，加之有營養豐富的酵母浸粉，霍亂弧菌又能利用蔗糖分解產酸，所以菌落較大，且呈黃色。大腸桿菌等雜菌菌落較小或不生長，故易識別。 黃色菌落只要是利用培養基中的蔗糖產酸，菌落就是黃色的，像溶澡弧菌、河流弧菌、麥氏弧菌、等要本培養基上均為黃色菌落，并不是黃色菌落就是霍亂弧菌。樣品中常常存在大量可以發酵蔗糖的干擾細菌，常常會碰到整個平板會變黃色的現象。 另：霍亂弧菌一旦檢出要立即送有關部門，普通實驗室是不準保存的！！ 黑色：細菌分解含硫物質產生硫化氫同時與培養基中的含鐵物質反應 , 從而產生黑色的菌落 . 以上內容來源于食品伙伴網 選用 TCBS 作為分離培養各種弧菌的培養基，其特異性不是很強；不少細菌在 TCBS 上也能生長，當生長較慢，需培養 24h 后方可長成 0.5~1mm 的黃，綠色菌落。為有效排除干擾，及時準確地判別出是否存在弧菌屬細菌，可結合弧菌屬細菌在 TCBS 培養基上生長的特點：弧菌生長快，菌落大，培養 4~5h 原劃線處有菌苔生長， 8~10h 可長出小菌落， 16h 菌落可達 2mm; 其他細菌在 TCBS 上無此特點。因此，在篩選弧菌屬細菌的選擇性培養基時要特別注意在確定的培養時間內進行菌落的觀察，時間超過即影響其準確性。 以上表 2 及文字節選自浙江工商大學趙廣英等人論文《水產品中多種致病性弧菌的分離鑒定》。 弧菌顯色培養基 原理： 目標菌在該培養基上生長，代謝產生特異性的酶與酶底物作用，底物經酶水解作用釋放顯色基團使菌落顯色�；魜y弧菌、擬態弧菌在該培養基上生長菌落呈（淡）藍綠色， 副溶血性弧菌在該培養基上生長菌落呈紫紅色。 使用方法 ： 按說明書使用量（不同廠家重量略有不同）稱取培養基于 1L 蒸餾水或去離子水（可根據實驗實際需要配比加水）；充分混勻，加熱并不斷攪拌至完全溶解，煮沸約 2min; 滅菌后的培養基冷卻至 50 攝氏度時，鋪平板，待培養基完全凝固后使用。使用前儲存于暗處。劃線接種后于 37 ℃ 培養 24 小時。 保存 ：干粉培養基于 30 ℃以下陰涼干燥處存放，制備好的平板于 2-8 ℃避光，可保存一周。 說明： 1 、同類產品存在不同配方，或采用不同的顯色劑，因此菌落形成的顏色不同。 2 、副溶血性弧菌在該顯色培養基上呈現紫紅色菌落； 注意：本培養基中含有的成分對人體有毒害作用，使用時請做好防護措施，避免與眼睛、皮膚接觸，避免吸入或吞食。 目前有進口科瑪嘉弧菌顯色培養基（干粉），國產陸橋弧菌顯色培養基（干粉），陸橋有新推出弧菌顯色培養基平板等產品。 按照國標方法配置的 TCBS 培養基價格比價便宜�；【@色培養基價格相對 TCBS 比較貴。一塊弧菌顯色培養基成本大約要十幾塊，對于蝦農來說是一筆不小的開支。不過弧菌顯色培養基對于副溶血弧菌等目標菌的分離效果要好于 TCBS 培養基，開發殺弧菌藥品，噬弧菌等的公司可以用來驗證藥品殺弧菌，特別是殺副溶血性弧菌的驗證。市面上水產用的 TCBS 培養基如果按照國標 GB4789.7 TCBS 配方生產的產品，也就是常用的黃弧菌，綠弧菌培養基，可能實際上對弧菌的分離效果并不明顯，國標 4789.7 是食品行業的標準，在檢出目標菌后一般還有進一步生化鑒定，以確定是哪類弧菌。但蝦農并不具備進一步實驗的技術和能力，只能根據肉眼判斷黃弧菌或者綠弧菌，而無法得知是否是導致蝦病的致病弧菌�；【@色培養基可以區分副溶血弧菌及其他幾種致病菌，對于殺弧菌產品的藥品公司有一定針對性，至少可以驗證殺弧菌前后幾類致病弧菌的數量驗證殺弧菌效果。
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