噬菌蛭弧菌微生物生態制劑——噬菌28的研制、應用及其生態效應

福建對蝦

1噬菌蛭弧菌微生物生態制劑的研究歷程

1979年，我國首次開展對噬菌蛭弧菌（以下簡稱蛭弧菌）的研究。在研究中，發現蛭弧菌對許多動物（包括人體）、植物致病菌，如霍亂弧菌、不凝集弧菌、傷寒沙門菌、副溶血弧菌、福氏志賀菌及大腸桿菌、嗜水氣單胞菌、鰻弧菌、溶藻弧菌、熒光假單胞菌等均具有顯著的裂解作用。作者研究證實，蛭弧菌對弧菌的裂解率為81.2%，對傷寒沙門菌的裂解率為 99.02%。中國水產科學研究院黃海研究所、中國海洋大學、上海水產大學、江蘇省海洋漁業研究所等單位研究證明，蛭弧菌對水生動物養殖中常見的副溶血弧菌、溶藻弧菌等革蘭氏陰性細菌的裂解率可達97.33%。江蘇省農林廳畜牧局、山東農業大學、南京農業大學、天津農學院等研究表明，蛭弧菌微生物生態制劑對畜禽細菌病的預防保護率平均為72.41%；治愈率平均為99.33%；促進生長的增重率首次為18.24%。
1981年，國家衛生部批準蛭弧菌的研究 （用生物學方法殺滅ElTor霍亂弧菌）”列為重點研究課題。1985年“細菌寄生菌——蛭弧菌的研究”獲國家衛生部甲級科技進步獎。
1989年，國家農業部批準“蛭弧菌及其微生物生態制劑用于防治動物細菌病的研究”課題。此后，作者在中國醫學細菌保藏管理中心弧菌噬菌體研究室、中國水產科學院無錫淡水漁業研究中心、上海水產大學、江蘇省微生物研究所的幫助和支持下，在我國首次將蛭弧菌微生物生態制劑應用到對蝦、蟹、魚、貝等水生動物細菌的防治上，并取得了顯著的效果。
1991～1993年，作者進一步與南京農業大學動物科學院、江蘇省農林廳畜牧局合作，將蛭弧菌微生物生態制劑應用到畜禽細菌病的防治上。
1994年，中國新獸藥評審委員會對蛭弧菌微生物生態制劑進行了全面的評審，中國獸藥監察所驗證和復核了蛭弧菌及其微生物生態制劑的全部技術資料和數據，經國家農業部批準，確認蛭弧菌及其微生物生態制劑符合國務院《獸藥管理條例》的規定。農業部批準蛭弧菌微生物生態制劑為國家二類新獸藥。同時將《蛭弧菌微生物生態制劑制造及檢驗規程草案》和《蛭弧菌微生物生態制劑質量標準》列為國家標準向全國發布。與此同時，農業部批準蛭弧菌為我國獸用微生物生態制劑生產用菌株，在國際上我國是繼美國之后第二個批準蛭弧菌為獸用微生物生態制劑生產用菌株的國家。1996年，農業部批準蛭弧菌微生物生態制劑規模化生產。同年國家科技部批準把蛭弧菌微生物生態制劑項目列為國家級火炬計劃項目，同時在全國推廣應用蛭弧菌微生物生態制劑。1997年國家科技部把“蛭弧菌微生物生態制劑的研究及其應用”列為國家重大科技成果。同年，科技部火炬中心參與該項目的共同投資開發，并同意在產品市場開拓、宣傳過程中使用“國家級火炬計劃項目”和中國火炬計劃“CTP”標志，可以出現“國家科技部火炬中心共同開發、生產蛭弧菌微生物生態制劑及其系列產品的內容”。
2000年，國家知識產權局授予蛭弧菌微生物生態制劑——《生物制菌液及其生產方法》發明專利權，專利號為ZL94111370•1，專利權人為秦生巨，專利權期限20年。
迄今為止，我國蛭弧菌的研究取得的主要成果可概括如下：①為我國建立了蛭弧菌的研究方法；②發現的蛭弧菌在加熱或氯仿致死的宿主中可迅速、更多地出現噬菌斑，經在死亡的宿主菌中增殖的蛭弧菌仍能感染活的宿主菌，這一事實具有重要的理論和實踐價值；③研究證實蛭弧菌對動物（包括人體）、植物的致病菌有裂解作用；④制定了我國動物用蛭弧菌微生物生態制劑制造和檢驗規程，建立了動物用蛭弧菌微生物生態制劑國家質量標準。

2蛭弧菌微生物生態制劑（噬菌28）的制造及應用

蛭弧菌微生物生態制劑的制造始于1991年9月，最初由南京麥克生物工程有限公司試制成功，并按國務院《獸藥管理條例》的規定，對其進行了小試、中試及臨床的一系列試驗，1994年農業部批準由江蘇巨豹實業有限公司的前身南京麥克生物工程有限公司申報的“蛭弧菌微生物生態制劑”為國家二類新獸藥，同時發布了《蛭弧菌微生物生態制劑制造及檢驗規程草案》和《蛭弧菌微生物生態制劑質量標準》。1996年，農業部批準蛭弧菌微生物生態制劑規模化由南京巨豹生物工程有限公司的前身江蘇省巨豹實業有限公司動物藥品廠生產。2000年國家知識產權局授予“蛭弧菌微生物生態制劑”發明專利權，專利權人秦生巨，專利權期限20年。目前南京巨豹生物工程有限公司是唯一獲得授權的“蛭弧菌微生物生態制劑”合法制造單位。并確定蛭弧菌微生物生態制劑的商品名—— 噬菌28（下稱噬菌28）。 噬菌28，表明蛭弧菌及其微生物生態制劑在我國28年的研究歷程。
2．1噬菌28菌種的篩選  國際通用的微生物生態制劑四大標準之首，菌種的標準是：微生物生態制劑的生產菌種必須是正常微生物群的成員或其生長促進菌種；這些菌種必須進行嚴格的分類、鑒定；這些菌種在自然生態環境中必須無毒、無害，原則上這些菌種來源于自然生態環境再回歸于自然環境。
蛭弧菌微生物生態制劑，菌種是質量控制的源頭，是產量、質量和效果的重中之重。其菌種是具有特定的生態效應和生物學性狀穩定的特定菌株，是由國家法定的菌種保藏管理機構經過嚴格分類、鑒定的。即使是這樣的菌種，每年還必須鑒定1次，確認其原有的生物學性狀沒有發生改變才能使用。自行分離、鑒定，未經過國家菌種保藏管理機構鑒定確認的菌種，是不能用于微生物生態制劑生產的。用于蛭弧菌制劑的生產菌種，應當來源于水（包括泥土），或水生動物體內；必須是經過嚴格的鑒定和分類的，營專性寄生生活的，在滅活的宿主細胞上能生長繁殖的蛭弧菌菌株。其他來源的、未經嚴格的鑒定和分類的、營非寄生生活的，不能在滅活的宿主細胞上生長繁殖的蛭弧菌菌株是不適合用于生產菌種的。
噬菌28的生產菌種是完全符合上述標準和要求的。在此要說明的是，由于歷史的原因，蛭弧菌標準培養物并沒有收入國家菌種保藏管理中心。
特別值得指出的是，所有生物物種都是會發生變異的，變異的細菌有可能發生超常的致病性而給人類造成災難。所以，非法生產、銷售蛭弧菌微生物生態制劑是非常危險的。
2．2蛭弧菌微生物生態制劑的生產工藝  蛭弧菌菌株除非發生突變，成為腐生或兼性寄生菌株，是不能在人工培養基上生長的。專性寄生的蛭弧菌菌株是嚴格的胞內寄生物，它不能利用環境中的營養物質。因此用于蛭弧菌生態制劑發酵培養的宿主菌細胞，必須洗滌、離心除去攜帶的培養基成分的濃厚的宿主菌懸液。蛭弧菌全部的生長繁殖過程整個是在宿主細胞內完成的，它的繁殖方式類似于噬菌體，利用宿主菌的遺傳物質復制子代，不同于其他細菌。因此，噬菌28的生產工藝流程也不同于普通細菌的發酵。噬菌28嚴格的說，是含有宿主菌的、半透明的、不含化學物質、無酸（臭）味的混合物。它的含量即使是蛭弧菌制劑的發酵母（原）液，也絕對不會大與108pfu/ml。
2．3噬菌28功能特征及生態效應  不含任何抗生素及其他化學物質，可不同程度的替代抗生素及其他化學藥物使用，能減少或消除抗生素及其他化學藥物殘留。對常見的革蘭陰性細菌有很強的寄生和殺滅功能。可有效地防治多種細菌性疾病，提高水生動物的抗病能力。對水生動物無生長抑制性，可促進水生動物的新陳代謝。發酵過程中產生的代謝物質可分解、轉化水中亞硝酸鹽，改善養殖水質，減少蛋白質向氨和胺轉化，減輕水中NH3 和有機質的污染。調節、平衡水體pH值。起效速度不及抗生素及其他化學藥物。但效果要持續15天以上，是任何抗生素及其他化學藥物所不及的。
盡管噬菌28與其他微生物生態制劑不同，噬菌28中的蛭弧菌對許多抗菌藥物具有較強的耐受性。但也禁止和抗菌藥物原液配伍使用，以防活性物質被高濃度的抗菌藥物破壞。蛭弧菌制劑由于具有起效慢，藥效持久的特點，噬菌28應在水生動物發病前或發病初期使用。

3噬菌28在水生動物養殖的臨床使用及其生態效應

自1989年蛭弧菌制劑首次在無錫地區養育珍珠的三角帆的嗜水氣單胞菌防治上的應用，到目前在水生動物細菌病防治上為首選微生物生態制劑，臨床使用已經歷了近20個年頭。人們對蛭弧菌制劑的生態效應和缺陷都有足夠的了解。可以歸納如下：
3．1安全性
無毒無害  每批產品腹腔注射小鼠3-4只，每只0.5ml，觀察4天，應無死亡。如有個別死亡，應加倍小鼠數目（6-8只）重試。如仍有個別死亡，則該批制品應保留15-20天，然后再用10只小鼠重試，如仍有死亡則安全試驗為不合格。安全試驗不合格產品不能出廠。
安全有效  用的蛭弧菌和噬菌體生產菌株，用嗜水氣單胞菌，副溶血弧菌,溶藻弧菌等10株菌以上為宿主菌進行效力測定。將宿主菌用適宜的培養基于37℃培養16-18小時，制成菌懸液。然后用瓊脂屋疊法檢測蛭弧菌、噬菌體對宿主菌的裂解能力。制品中的蛭弧菌、噬菌體對上述測定的宿主菌的裂解率在80%以上時，認為合格。如裂解率低于80%時，應重試。如重試仍不合格。則認為不合格。不合格菌株不得用于生產。用于測定效力的菌株應有80%以上為標準菌株。
3．2噬菌28的生態效應
生物拮抗效應  蛭弧菌是正常微生物群成員之一，它可以有序的植于粘膜或細胞之間則形成生物屏障。這些屏障可以阻止病原微生物的定植，起著占位、爭奪營養、互利互生等生物共生或拮抗作用。服用蛭弧菌制劑后，機體能產生生物防御作用。
防病治病效應 蛭弧菌制劑可以顯著地提高中國對蝦幼體變態率和存活率（徐琴）。成活率達到99%以上，增產率可達395.60-482.14%（唐洛明）。對嗜水氣單細胞菌的裂解率在80%以上（秦生巨）。可降低由人工感染引起的甲魚、河豚魚嗜水氣單胞菌敗血癥的發病率85.5%，死亡率93.3%，提高增重率16%（黃琪琰）。治療大菱鲆重癥出血病治愈率為98.7%（劉恒義）。對弧菌裂解率為87．8％，九孔鮑魚病原性細菌裂解率為32．4-87．5％（蔡俊鵬）。
3．3噬菌28使用方法
（1）水體直接潑灑，1米水深1畝水面根據水質好壞，用250-1000
（2）種苗期用藥，在不改變其他養殖條件和環境的情況下，可在種苗密集的1方水體中加2500-5000ml，浸浴2小時以上。
（3）如腸炎等腸道癥狀明顯時，可用漁人得利拌餌料投喂.

滄海一粟

沙發，得10金幣，去下東西

jay

能否講講它對哪些有益菌的分裂作用，在使用過程中有哪些注意事項？？