噬菌蛭弧菌微生物生態(tài)制劑——噬菌28的研制、應(yīng)用及其生態(tài)效應(yīng)

福建對蝦

1噬菌蛭弧菌微生物生態(tài)制劑的研究歷程

1979年，我國首次開展對噬菌蛭弧菌（以下簡稱蛭弧菌）的研究。在研究中，發(fā)現(xiàn)蛭弧菌對許多動物（包括人體）、植物致病菌，如霍亂弧菌、不凝集弧菌、傷寒沙門菌、副溶血弧菌、福氏志賀菌及大腸桿菌、嗜水氣單胞菌、鰻弧菌、溶藻弧菌、熒光假單胞菌等均具有顯著的裂解作用。作者研究證實(shí)，蛭弧菌對弧菌的裂解率為81.2%，對傷寒沙門菌的裂解率為 99.02%。中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海研究所、中國海洋大學(xué)、上海水產(chǎn)大學(xué)、江蘇省海洋漁業(yè)研究所等單位研究證明，蛭弧菌對水生動物養(yǎng)殖中常見的副溶血弧菌、溶藻弧菌等革蘭氏陰性細(xì)菌的裂解率可達(dá)97.33%。江蘇省農(nóng)林廳畜牧局、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)、天津農(nóng)學(xué)院等研究表明，蛭弧菌微生物生態(tài)制劑對畜禽細(xì)菌病的預(yù)防保護(hù)率平均為72.41%；治愈率平均為99.33%；促進(jìn)生長的增重率首次為18.24%。
1981年，國家衛(wèi)生部批準(zhǔn)蛭弧菌的研究 （用生物學(xué)方法殺滅ElTor霍亂弧菌）”列為重點(diǎn)研究課題。1985年“細(xì)菌寄生菌——蛭弧菌的研究”獲國家衛(wèi)生部甲級科技進(jìn)步獎。
1989年，國家農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)“蛭弧菌及其微生物生態(tài)制劑用于防治動物細(xì)菌病的研究”課題。此后，作者在中國醫(yī)學(xué)細(xì)菌保藏管理中心弧菌噬菌體研究室、中國水產(chǎn)科學(xué)院無錫淡水漁業(yè)研究中心、上海水產(chǎn)大學(xué)、江蘇省微生物研究所的幫助和支持下，在我國首次將蛭弧菌微生物生態(tài)制劑應(yīng)用到對蝦、蟹、魚、貝等水生動物細(xì)菌的防治上，并取得了顯著的效果。
1991～1993年，作者進(jìn)一步與南京農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)院、江蘇省農(nóng)林廳畜牧局合作，將蛭弧菌微生物生態(tài)制劑應(yīng)用到畜禽細(xì)菌病的防治上。
1994年，中國新獸藥評審委員會對蛭弧菌微生物生態(tài)制劑進(jìn)行了全面的評審，中國獸藥監(jiān)察所驗(yàn)證和復(fù)核了蛭弧菌及其微生物生態(tài)制劑的全部技術(shù)資料和數(shù)據(jù)，經(jīng)國家農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)，確認(rèn)蛭弧菌及其微生物生態(tài)制劑符合國務(wù)院《獸藥管理?xiàng)l例》的規(guī)定。農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)蛭弧菌微生物生態(tài)制劑為國家二類新獸藥。同時(shí)將《蛭弧菌微生物生態(tài)制劑制造及檢驗(yàn)規(guī)程草案》和《蛭弧菌微生物生態(tài)制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》列為國家標(biāo)準(zhǔn)向全國發(fā)布。與此同時(shí)，農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)蛭弧菌為我國獸用微生物生態(tài)制劑生產(chǎn)用菌株，在國際上我國是繼美國之后第二個(gè)批準(zhǔn)蛭弧菌為獸用微生物生態(tài)制劑生產(chǎn)用菌株的國家。1996年，農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)蛭弧菌微生物生態(tài)制劑規(guī)模化生產(chǎn)。同年國家科技部批準(zhǔn)把蛭弧菌微生物生態(tài)制劑項(xiàng)目列為國家級火炬計(jì)劃項(xiàng)目，同時(shí)在全國推廣應(yīng)用蛭弧菌微生物生態(tài)制劑。1997年國家科技部把“蛭弧菌微生物生態(tài)制劑的研究及其應(yīng)用”列為國家重大科技成果。同年，科技部火炬中心參與該項(xiàng)目的共同投資開發(fā)，并同意在產(chǎn)品市場開拓、宣傳過程中使用“國家級火炬計(jì)劃項(xiàng)目”和中國火炬計(jì)劃“CTP”標(biāo)志，可以出現(xiàn)“國家科技部火炬中心共同開發(fā)、生產(chǎn)蛭弧菌微生物生態(tài)制劑及其系列產(chǎn)品的內(nèi)容”。
2000年，國家知識產(chǎn)權(quán)局授予蛭弧菌微生物生態(tài)制劑——《生物制菌液及其生產(chǎn)方法》發(fā)明專利權(quán)，專利號為ZL94111370•1，專利權(quán)人為秦生巨，專利權(quán)期限20年。
迄今為止，我國蛭弧菌的研究取得的主要成果可概括如下：①為我國建立了蛭弧菌的研究方法；②發(fā)現(xiàn)的蛭弧菌在加熱或氯仿致死的宿主中可迅速、更多地出現(xiàn)噬菌斑，經(jīng)在死亡的宿主菌中增殖的蛭弧菌仍能感染活的宿主菌，這一事實(shí)具有重要的理論和實(shí)踐價(jià)值；③研究證實(shí)蛭弧菌對動物（包括人體）、植物的致病菌有裂解作用；④制定了我國動物用蛭弧菌微生物生態(tài)制劑制造和檢驗(yàn)規(guī)程，建立了動物用蛭弧菌微生物生態(tài)制劑國家質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

2蛭弧菌微生物生態(tài)制劑（噬菌28）的制造及應(yīng)用

蛭弧菌微生物生態(tài)制劑的制造始于1991年9月，最初由南京麥克生物工程有限公司試制成功，并按國務(wù)院《獸藥管理?xiàng)l例》的規(guī)定，對其進(jìn)行了小試、中試及臨床的一系列試驗(yàn)，1994年農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)由江蘇巨豹實(shí)業(yè)有限公司的前身南京麥克生物工程有限公司申報(bào)的“蛭弧菌微生物生態(tài)制劑”為國家二類新獸藥，同時(shí)發(fā)布了《蛭弧菌微生物生態(tài)制劑制造及檢驗(yàn)規(guī)程草案》和《蛭弧菌微生物生態(tài)制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》。1996年，農(nóng)業(yè)部批準(zhǔn)蛭弧菌微生物生態(tài)制劑規(guī)模化由南京巨豹生物工程有限公司的前身江蘇省巨豹實(shí)業(yè)有限公司動物藥品廠生產(chǎn)。2000年國家知識產(chǎn)權(quán)局授予“蛭弧菌微生物生態(tài)制劑”發(fā)明專利權(quán)，專利權(quán)人秦生巨，專利權(quán)期限20年。目前南京巨豹生物工程有限公司是唯一獲得授權(quán)的“蛭弧菌微生物生態(tài)制劑”合法制造單位。并確定蛭弧菌微生物生態(tài)制劑的商品名—— 噬菌28（下稱噬菌28）。 噬菌28，表明蛭弧菌及其微生物生態(tài)制劑在我國28年的研究歷程。
2．1噬菌28菌種的篩選  國際通用的微生物生態(tài)制劑四大標(biāo)準(zhǔn)之首，菌種的標(biāo)準(zhǔn)是：微生物生態(tài)制劑的生產(chǎn)菌種必須是正常微生物群的成員或其生長促進(jìn)菌種；這些菌種必須進(jìn)行嚴(yán)格的分類、鑒定；這些菌種在自然生態(tài)環(huán)境中必須無毒、無害，原則上這些菌種來源于自然生態(tài)環(huán)境再回歸于自然環(huán)境。
蛭弧菌微生物生態(tài)制劑，菌種是質(zhì)量控制的源頭，是產(chǎn)量、質(zhì)量和效果的重中之重。其菌種是具有特定的生態(tài)效應(yīng)和生物學(xué)性狀穩(wěn)定的特定菌株，是由國家法定的菌種保藏管理機(jī)構(gòu)經(jīng)過嚴(yán)格分類、鑒定的。即使是這樣的菌種，每年還必須鑒定1次，確認(rèn)其原有的生物學(xué)性狀沒有發(fā)生改變才能使用。自行分離、鑒定，未經(jīng)過國家菌種保藏管理機(jī)構(gòu)鑒定確認(rèn)的菌種，是不能用于微生物生態(tài)制劑生產(chǎn)的。用于蛭弧菌制劑的生產(chǎn)菌種，應(yīng)當(dāng)來源于水（包括泥土），或水生動物體內(nèi)；必須是經(jīng)過嚴(yán)格的鑒定和分類的，營專性寄生生活的，在滅活的宿主細(xì)胞上能生長繁殖的蛭弧菌菌株。其他來源的、未經(jīng)嚴(yán)格的鑒定和分類的、營非寄生生活的，不能在滅活的宿主細(xì)胞上生長繁殖的蛭弧菌菌株是不適合用于生產(chǎn)菌種的。
噬菌28的生產(chǎn)菌種是完全符合上述標(biāo)準(zhǔn)和要求的。在此要說明的是，由于歷史的原因，蛭弧菌標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)物并沒有收入國家菌種保藏管理中心。
特別值得指出的是，所有生物物種都是會發(fā)生變異的，變異的細(xì)菌有可能發(fā)生超常的致病性而給人類造成災(zāi)難。所以，非法生產(chǎn)、銷售蛭弧菌微生物生態(tài)制劑是非常危險(xiǎn)的。
2．2蛭弧菌微生物生態(tài)制劑的生產(chǎn)工藝  蛭弧菌菌株除非發(fā)生突變，成為腐生或兼性寄生菌株，是不能在人工培養(yǎng)基上生長的。專性寄生的蛭弧菌菌株是嚴(yán)格的胞內(nèi)寄生物，它不能利用環(huán)境中的營養(yǎng)物質(zhì)。因此用于蛭弧菌生態(tài)制劑發(fā)酵培養(yǎng)的宿主菌細(xì)胞，必須洗滌、離心除去攜帶的培養(yǎng)基成分的濃厚的宿主菌懸液。蛭弧菌全部的生長繁殖過程整個(gè)是在宿主細(xì)胞內(nèi)完成的，它的繁殖方式類似于噬菌體，利用宿主菌的遺傳物質(zhì)復(fù)制子代，不同于其他細(xì)菌。因此，噬菌28的生產(chǎn)工藝流程也不同于普通細(xì)菌的發(fā)酵。噬菌28嚴(yán)格的說，是含有宿主菌的、半透明的、不含化學(xué)物質(zhì)、無酸（臭）味的混合物。它的含量即使是蛭弧菌制劑的發(fā)酵母（原）液，也絕對不會大與108pfu/ml。
2．3噬菌28功能特征及生態(tài)效應(yīng)  不含任何抗生素及其他化學(xué)物質(zhì)，可不同程度的替代抗生素及其他化學(xué)藥物使用，能減少或消除抗生素及其他化學(xué)藥物殘留。對常見的革蘭陰性細(xì)菌有很強(qiáng)的寄生和殺滅功能。可有效地防治多種細(xì)菌性疾病，提高水生動物的抗病能力。對水生動物無生長抑制性，可促進(jìn)水生動物的新陳代謝。發(fā)酵過程中產(chǎn)生的代謝物質(zhì)可分解、轉(zhuǎn)化水中亞硝酸鹽，改善養(yǎng)殖水質(zhì)，減少蛋白質(zhì)向氨和胺轉(zhuǎn)化，減輕水中NH3 和有機(jī)質(zhì)的污染。調(diào)節(jié)、平衡水體pH值。起效速度不及抗生素及其他化學(xué)藥物。但效果要持續(xù)15天以上，是任何抗生素及其他化學(xué)藥物所不及的。
盡管噬菌28與其他微生物生態(tài)制劑不同，噬菌28中的蛭弧菌對許多抗菌藥物具有較強(qiáng)的耐受性。但也禁止和抗菌藥物原液配伍使用，以防活性物質(zhì)被高濃度的抗菌藥物破壞。蛭弧菌制劑由于具有起效慢，藥效持久的特點(diǎn)，噬菌28應(yīng)在水生動物發(fā)病前或發(fā)病初期使用。

3噬菌28在水生動物養(yǎng)殖的臨床使用及其生態(tài)效應(yīng)

自1989年蛭弧菌制劑首次在無錫地區(qū)養(yǎng)育珍珠的三角帆的嗜水氣單胞菌防治上的應(yīng)用，到目前在水生動物細(xì)菌病防治上為首選微生物生態(tài)制劑，臨床使用已經(jīng)歷了近20個(gè)年頭。人們對蛭弧菌制劑的生態(tài)效應(yīng)和缺陷都有足夠的了解。可以歸納如下：
3．1安全性
無毒無害  每批產(chǎn)品腹腔注射小鼠3-4只，每只0.5ml，觀察4天，應(yīng)無死亡。如有個(gè)別死亡，應(yīng)加倍小鼠數(shù)目（6-8只）重試。如仍有個(gè)別死亡，則該批制品應(yīng)保留15-20天，然后再用10只小鼠重試，如仍有死亡則安全試驗(yàn)為不合格。安全試驗(yàn)不合格產(chǎn)品不能出廠。
安全有效  用的蛭弧菌和噬菌體生產(chǎn)菌株，用嗜水氣單胞菌，副溶血弧菌,溶藻弧菌等10株菌以上為宿主菌進(jìn)行效力測定。將宿主菌用適宜的培養(yǎng)基于37℃培養(yǎng)16-18小時(shí)，制成菌懸液。然后用瓊脂屋疊法檢測蛭弧菌、噬菌體對宿主菌的裂解能力。制品中的蛭弧菌、噬菌體對上述測定的宿主菌的裂解率在80%以上時(shí)，認(rèn)為合格。如裂解率低于80%時(shí)，應(yīng)重試。如重試仍不合格。則認(rèn)為不合格。不合格菌株不得用于生產(chǎn)。用于測定效力的菌株應(yīng)有80%以上為標(biāo)準(zhǔn)菌株。
3．2噬菌28的生態(tài)效應(yīng)
生物拮抗效應(yīng)  蛭弧菌是正常微生物群成員之一，它可以有序的植于粘膜或細(xì)胞之間則形成生物屏障。這些屏障可以阻止病原微生物的定植，起著占位、爭奪營養(yǎng)、互利互生等生物共生或拮抗作用。服用蛭弧菌制劑后，機(jī)體能產(chǎn)生生物防御作用。
防病治病效應(yīng) 蛭弧菌制劑可以顯著地提高中國對蝦幼體變態(tài)率和存活率（徐琴）。成活率達(dá)到99%以上，增產(chǎn)率可達(dá)395.60-482.14%（唐洛明）。對嗜水氣單細(xì)胞菌的裂解率在80%以上（秦生巨）。可降低由人工感染引起的甲魚、河豚魚嗜水氣單胞菌敗血癥的發(fā)病率85.5%，死亡率93.3%，提高增重率16%（黃琪琰）。治療大菱鲆重癥出血病治愈率為98.7%（劉恒義）。對弧菌裂解率為87．8％，九孔鮑魚病原性細(xì)菌裂解率為32．4-87．5％（蔡俊鵬）。
3．3噬菌28使用方法
（1）水體直接潑灑，1米水深1畝水面根據(jù)水質(zhì)好壞，用250-1000
（2）種苗期用藥，在不改變其他養(yǎng)殖條件和環(huán)境的情況下，可在種苗密集的1方水體中加2500-5000ml，浸浴2小時(shí)以上。
（3）如腸炎等腸道癥狀明顯時(shí)，可用漁人得利拌餌料投喂.

滄海一粟

沙發(fā)，得10金幣，去下東西

jay

能否講講它對哪些有益菌的分裂作用，在使用過程中有哪些注意事項(xiàng)？？