【推薦】以下幾個步驟，讓你秒變芽胞桿菌產品識別達人

小通仔

    芽胞桿菌在不良環境中可產生特有孢子結構以對抗外界帶來的致命傷害，因而芽胞桿菌可耐受飼料制粒中高溫、高壓、高濕等不良因子，且產生的益生效益顯著，近年來已廣泛應用在醫藥、畜牧、水產等領域。伴隨芽胞桿菌發酵工藝日趨成熟，生產成本進一步降低，使得芽胞桿菌在各個領域應用空間巨大。但由于技術水平與檢測能力受限，傳統檢測方法最快需2-3天，市場缺乏相應的檢測方法。市場產品普遍存在產品以次充好，產品實際活菌數與標識差異較大等現象。很多廠家、分子公司與經銷商無法快速辨別產品檔次和優劣，錯把稀釋產品當原菌粉，把低活菌數產品當高活菌數產品購買，進而影響自身產品生產銷售。

   

    成都水產科技有限公司微生物研究室通過經驗摸索，建立了一條 “望 、聞 、察 、溶 、計”5字方針的芽胞桿菌產品純度及活菌數級別快速分辯流程，最快1h內得到初步結果，具體判定方法如下：

1、“望”與“聞”：取2g產品于稱量紙上均勻攤開，分別觀察產品顏色及氣味。一般情況下芽胞桿菌原菌粉產品呈黃色至深棕色，且原粉細膩、基本無白色顆粒感；有直接發酵后的腥臭味，無米糠、麩皮、輕質碳酸鈣、次粉、滑石粉等載體原料及香精的氣味，如圖1所示。

2、“察”：取少量產品菌粉于載玻片上均勻攤開，于40倍顯微鏡下觀察。一般情況下原菌粉呈現形態均一的菌團狀，基本無反光晶體或片狀纖維結構，如圖2所示。

3、“溶”：準確稱取1g樣品至99mL滅菌水中，于20℃、180r/min充分勻質20min。一般情況下原菌粉產品溶解后溶液均一性好，瓶底沉淀搖晃易分散且均一。稀釋后的產品溶解后有明顯黑色、淺白色或淺棕色顆粒狀沉淀物質，瓶壁有顆粒狀物質附著，如圖3所示。

4、“計”：樣品預處理參照上述第4點進行，取100 μL勻質液至900 μL無菌水中振蕩均勻，取20μL稀釋液涂布于干凈載玻片上（面積1平方厘米，約為大拇指蓋大小），火焰上方固定、結晶紫染色，100倍顯微鏡下隨機統計3個視野下芽胞數量，并求平均值。當芽胞數<10個，產品芽胞桿菌小于等于每克10億，當芽胞數介于10-120個，產品芽胞桿菌數約每克100億；當芽胞數介于120~200，產品芽胞桿菌數約每克1000億。

小結：芽胞桿菌原菌粉具有芽胞菌株發酵后特有腥臭味、產品顏色為黃色至深棕色、質感細膩、基本無白色顆粒感，產品溶解后溶液均一性好、底部沉淀搖晃易分散，40倍顯微鏡下菌粉形態均一，100倍顯微鏡下芽胞數介于120—200個。

芽胞桿菌稀釋產品具有不同程度的香味（常見為麩皮、米糠香味）、產品顏色為淺白色或淡黃色、質感較為粗糙甚至出現肉眼可見的白色顆粒，產品溶解后底部可能會出現黑色、淺白色或淺棕色顆粒狀沉淀物質，部分產品瓶壁會有顆粒狀物質附著，40倍顯微鏡下可見反光晶體或片狀纖維結構，100倍顯微鏡下芽胞數介于10-120個或基本觀察不到芽胞。

來源：通威水產科技頻道

作者：茍小蘭、趙桂仙、蘇艷秋、張良