南美白對蝦“黑腳偷死”，檢出偷死野田村病毒一例

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[病例401]
       福建省漳州市東山縣西埔鎮一南美白對蝦養殖池塘，高位池，冬棚，面積1.8畝，平均水深1.6米，底部納米管增氧（見圖1），2016年11月13日一次性放苗50萬尾，目前規格160尾/kg左右，每日三餐，兩餐投喂飼料，一餐投喂凍豐年蟲。
       2017年2月15日，在池塘的排污口處發現1尾死蝦；
       2月16日，在排污口處發現80尾死蝦，部分死蝦呈現“黑腳”癥；
       2月17日，在排污口處發現200尾死蝦，下午3點40分到該養殖池塘調查，測定水溫23.3℃，水質指標pH值8.0、氨氮0.4mg/L、亞硝酸鹽0.4mg/L、溶解氧7.03mg/L，水中藻類以綠藻為主。在池塘的樓梯口處可見發病蝦距水面5~10cm處游水（見圖2），從池塘中部排污口處撈出大量偷死蝦，偷死蝦有三分之一呈“黑腳”癥（見圖3）。從料臺取4尾未發病蝦（見圖4）、樓梯口處取8尾發病的蝦（見圖5），從所取12尾蝦的肝胰腺中接種進行細菌分離培養，并取樣品分別用95%酒精和波恩氏固定液固定做病毒檢測和組織病理切片分析，同時取6尾死蝦（見圖6）用95%酒精固定做病毒檢測。
       2月18日，共偷死100斤蝦；
       2月19日，共偷死700斤蝦；
       2月20日，抓蝦。
       結果：在28℃經24小時培養，4尾未發病蝦蝦肝胰腺中未分理出細菌，8尾病蝦其中5尾肝胰腺中分離出大量細菌（見圖7），分離菌經16S rDNA測序比對初步鑒定為哈維氏弧菌；對采取的18尾蝦樣品用（RT-）PCR進行病毒檢測，結果顯示采取的18尾南美白對蝦白斑癥病毒（WSSV）、傳染性皮下及造血器官壞死病毒（IHHNV）、對蝦桿狀病毒（BP）、肝胰腺細小病毒（HPV）、蝦肝腸胞蟲（EHP）、桃拉病毒（TSV）、黃頭病毒（YHV）、傳染性肌肉壞死病毒（IMNV）、虹彩病毒（IV）均呈陰性；4尾未發病蝦和8尾發病蝦偷死野田村病毒（CMNV）均呈陽性，6尾死蝦中有2尾偷死野田村病毒呈陽性（見圖8），將陽性樣品的PCR擴增產物進行測序比對，其序列與GenBank中偷死野田村病毒的同源性為99.5%。組織病理切片可見肝胰腺腺管萎縮、腺管間水腫（見圖9），其它組織未見明顯異常。
       分析：1、2016年11月，在福建地區高位池和水泥池養殖的南美白對蝦出現了一種養殖戶稱為“黑腳偷死”的疾病，具有明顯的傳染性，嚴重的死亡率高達60%。2014年中科院黃海所科研人員通過研究，證實一種新型的野田村病毒是導致對蝦偷死病的疑似病原，這種病毒被命名為對蝦“偷死野田村病毒”。
       2、本病例中未發病蝦和病蝦都感染了偷死野田村病毒，部分病蝦能分離出大量的細菌，本病例是否是由偷死野田村病毒感染或繼發細菌感染引起的發病，尚需要進一步的流行病學調查和更多的案例來證實。（利洋水產研究所 雷燕 張文文 戚瑞榮 利洋西埔店 張強 提供 2017.03.09）

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